【求助】信号通路抑制剂的使用困惑

研究背景：已知抑制JNK激酶的活性可以实现药效A,这已经是被反复证明的了.
而目前我在实验中发现，药物A可以抑制JNK激酶的活性，并且可以实现药效A。
我的问题是：如何证明药物A是通过抑制JNK激酶的活性来实现药效A的？
我目前只能想到的做法是：采用JNk的特异性抑制剂处理细胞，如果可以实现药效A，则可以旁证药物A的作用途径。但是这并不能提供直接证据，因此求问是否有其他更好的办法？

药物A有没有对照呢？关键是你的药物是什么性质的？信号分子？抗体？小分子化合物？
1、使用药物A和对照以后，检测jnk信号通路相关蛋白的变化.应该是药物A有相应变化，对照无。
2、如果你的药物A是细胞因子或者信号分子，，可以用相应中和抗体，看看能不能使药效消失。
3、最好的办法是使用药物A以后，你重新激活JNK激酶，看看药效A能不能消失活减弱。
可以通过转染JNK通路下游效应分子的质粒来实现。

lz。你这个问题是这样的。你这个情况要看你的药物A是什么药物活性的；如果是激动剂，那么你可以找出JNK是不是和这个激动剂的受体有关系，如果JNK就是这个受体的下游通路，那么好办了，使用药物A作用受体的拮抗剂解除药物A的作用，而其他的组不适用拮抗剂，加入拮抗剂的细胞JNK的活性上升，药效A消失；那么也可以证明你的想法；
如果你的药物A是拮抗剂或者你找不到JNK和药物A作用受体之间的关系；你使用抑制剂抑制JNK激酶的时候，其实已经是在帮助药物A实现药效A了；所以你没有办法证明这个药效A就是药物A直接引起来的。也有可能是抑制剂导致的。
那么只剩下一个办法了，可以构建腺病毒或者使用siRNA来提高JNK的表达，看看药效A是不是消失，如果消失了，那么也可以证明药物A就是通过JNK起作用的。不过siRNA的使用最多不能超过5天，因为他会消耗的；其实你只要看出来有增加或者减少的趋势就可以了，没有必要一定要求很高。基本就是这样吧。有什么问题可以站内信我。good luck！