【求助】关于克隆包含pri-miRNA的基因组片段到表达载体来表达miRNA的问题
丁香园论坛
1906
很多文章使用这种方法来表达miRNA, 而且我在论坛上看到很多坛友也比较推崇这个方法。但是我最近遇到了问题:我想要克隆表达的miRNA具有5p和3p两种剪切形式,理论上我把包含该pri-miRNA的基因组片段到表达载体在细胞里表达之后,这种情况下我表达出来的miRNA是兼有5p 3p两种形式?或者是只有一种呢?
很困惑,请大家不吝赐教!
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1. 查文献,看这个miRNA的5p和3p是否都有表达,还是以其中一个为主要产物
2. 如果想得到5p和3p其中一个,先扩完整的,再进行突变处理
2. 如果想得到5p和3p其中一个,先扩完整的,再进行突变处理
吴佰霖 wrote:
1. 查文献,看这个miRNA的5p和3p是否都有表达,还是以其中一个为主要产物
2. 如果想得到5p和3p其中一个,先扩完整的,再进行突变处理
1. 文献里的设计到5p和3p两种剪切体的好像都是用的miRNA mimics, 目前还没看到用这种方法的。
2. 这种方法我也想过,但是我预测的是只有3p能够Target到目的基因,5p无法Target,所以就无法确定该怎么突变处理。
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