【求助】腺病毒构建相关问题

各位战友，大家好，我想请教个问题，在构建重组腺病毒载体时是不是必须先构进T载体中呢？谢谢！

不是一定非要克隆到T载体，你也可以选择直接进行PCR产物酶切（注意引物设计两端的酶切位点选择和保护碱基），然后连接到你需要的目的骨架上。个人认为，我们用T载体主要是因为它作为中间克隆载体，相对比较容易操作，尽管想起来会觉得多了中间步骤，但是每一步都容易验证（比如克隆的片段需要测序是否正确，酶切验证等等），因此到最后的质粒构建过程都会比较可靠。

对于我个人而言，我不喜欢直接酶切PCR，因为不知道为什么，我自己这样做的克隆效率，较之我老老实实克隆进入T-载体，成功效率要低一些。当然也许是因为我习惯使然，也许是因为我手笨好，不见得别人就做不好。习惯而已

非常感谢！