【求助】证明目的蛋白是已知受体的配体的权威证据是什么？

丁香园论坛2015-08-21

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伊果

目前我通过原核表达系统获得一个可溶性蛋白，是一个原核生物蛋白，目的是想看看它是否为一真核生物死亡受体的配体。请问需要做什么实验，提供怎样的证据才有说服力？谢在先！

LoftyMan

1. 该蛋白刺激细胞，观察受体和受体下游分子的表达情况有没有变化

2. 该蛋白刺激细胞，该死亡受体的激活会引发什么？知道的情况下看该情况是否发生

3. Luc

4. IP加IB

5. confocal和FRET

伊果

若用蛋白直接刺激细胞，蛋白需要在固相包被么？死亡受体是fas，引发细胞凋亡。另外，若我获取的蛋白是配体的话，那么验证它与fas的结合是否用体外方法如IP或pull-down要比体内的方法如双杂交或FRET更好些？

euthor_hsu

Biacore可以直接检测蛋白蛋白相互作用（定性定量）。
论说服力的话，蛋白结晶并X射线晶体衍射，直接把结构解了，那就完美了。
但是不是配体的关键还是在于它能不能引起受体下游的功能，关键还是要检测fas下游的蛋白。

伊果

euthor_hsu wrote:
Biacore可以直接检测蛋白蛋白相互作用（定性定量）。
论说服力的话，蛋白结晶并X射线晶体衍射，直接把结构解了，那就完美了。
但是不是配体的关键还是在于它能不能引起受体下游的功能，关键还是要检测fas下游的蛋白。

嗯，做结晶是我当初一个完美的设想，现在还是想先做一下功能。还是那个问题，若是用蛋白作为配体作用细胞，蛋白需要固定么？

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