【求助】问一个关于质粒的基础问题
丁香园论坛
1011
刚刚开始做实验 请教一个关于质粒比较基础的问题，质粒转染细胞后，是同细胞内的基因相融合后表达还是仍以质粒的环形形式存在表达？每个转染细胞内转染进入的质粒数量是怎么样的啊？这个数量和蛋白表达多少有没有关系？还有个问题是请问现在最常用的质粒转染技术是什么？
菜鸟级的问题，请大家积极帮忙，多谢！！
菜鸟级的问题，请大家积极帮忙，多谢！！
两种转染。 酶切，基因相融合。非酶切，环形形式存在表达。我用lipofedamin
2425611 wrote:
刚刚开始做实验 请教一个关于质粒比较基础的问题，质粒转染细胞后，是同细胞内的基因相融合后表达还是仍以质粒的环形形式存在表达？每个转染细胞内转染进入的质粒数量是怎么样的啊？这个数量和蛋白表达多少有没有关系？还有个问题是请问现在最常用的质粒转染技术是什么？
菜鸟级的问题，请大家积极帮忙，多谢！！
我以为质粒转染细胞后应该是既有同细胞内的基因组相融合，也有自身环形形式存在的。与基因组融合后的质粒可以在细胞分裂的时候带给子细胞，所以可以用来筛选稳定细胞株。而有的质粒则在传代过程中丢失。每个转染细胞内的质粒数量就很难说了，看转染效率吧。从概率来说，当然是数量越多，蛋白表达会高一点，当然也不是绝对的。最常用的转染试剂包括磷酸钙、PEI、lipofectamine等等，还有各个生物公司有自己的试剂，质量应该也都不错。
质粒转染的效率不如病毒转染的效率高，像慢病毒，可以稳定整合到基因组，子代也不会丢失
一般用的pcDNA3系列的质粒，在筛选压力下可以工作一段时间，也有pcDNA5的，可以整合到基因组上。
本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴
师兄微信号：shixiongcoming
