【求助】问一个关于质粒的基础问题
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刚刚开始做实验 请教一个关于质粒比较基础的问题,质粒转染细胞后,是同细胞内的基因相融合后表达还是仍以质粒的环形形式存在表达?每个转染细胞内转染进入的质粒数量是怎么样的啊?这个数量和蛋白表达多少有没有关系?还有个问题是请问现在最常用的质粒转染技术是什么?
菜鸟级的问题,请大家积极帮忙,多谢!!
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两种转染。 酶切,基因相融合。非酶切,环形形式存在表达。我用lipofedamin
2425611 wrote:
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我以为质粒转染细胞后应该是既有同细胞内的基因组相融合,也有自身环形形式存在的。与基因组融合后的质粒可以在细胞分裂的时候带给子细胞,所以可以用来筛选稳定细胞株。而有的质粒则在传代过程中丢失。每个转染细胞内的质粒数量就很难说了,看转染效率吧。从概率来说,当然是数量越多,蛋白表达会高一点,当然也不是绝对的。最常用的转染试剂包括磷酸钙、PEI、lipofectamine等等,还有各个生物公司有自己的试剂,质量应该也都不错。
质粒转染的效率不如病毒转染的效率高,像慢病毒,可以稳定整合到基因组,子代也不会丢失
一般用的pcDNA3系列的质粒,在筛选压力下可以工作一段时间,也有pcDNA5的,可以整合到基因组上。
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