【求助】请教大家一个关于报告基因质粒瞬时转染与报告基因表达的问题，问题比较长，谢谢

想请教大家，在我研究的信号转导通路中，转录因子要形成二聚体转移到核内与调控序列结合启动后续目的基因的表达，报告基因质粒含转录因子调控序列和荧光素酶基因，我在想如果用瞬时转染的话，那么质粒只在细胞质之中，并未整合到核基因组中，转录因子又必须是要转入核内与调控序列结合启动荧光素酶表达的，那瞬时转染质粒的细胞能用于报告基因分析吗？

用瞬时转染是可以用来做报告基因分析的，这类的例子不在少数。

质粒确实不会整合到基因组上，但是它表达出来的蛋白（也就是你的转录因子）是可以转运到核内的（只要你的蛋白含有入核序列NLS）就可用结合到调控序列并启动荧光素酶表达。

其实所有的转录因子不都是这样子的吗？它们在细胞质中形成成熟的蛋白之后才转到细胞核内行使起功能。所以说他们的原理是类似的。

蛋白和基因是有所区别的~~~

我还是没有明白，可能是我的问题没问清楚，我的报告基因质粒上含有转录因子对应的调控序列（并非转录因子基因）和荧光素酶报告基因，就算你说的质粒能表达出转录因子能入核与核内调控序列结合启动后续基因表达，可是核内并未整合有外源的荧光素酶基因，又怎么表达出荧光素酶呢？这部分的分子知识我很欠缺，也许我钻牛角尖了，可是我确实没弄明白，希望woxingwosu能不吝赐教，帮我搞清楚这个问题，非常谢谢！

我在想在瞬时转染报告基因分析中，是不是转录因子也可以与细胞质中的质粒上的调控序列作用调控荧光素酶基因表达出蛋白质，这样似乎说得过去一些，

呵呵，那就继续讨论一下。你的意思是指你的报告基因质粒是指含有转录因子对应的基因的promoter，这个promoter后面跟着荧光素酶报告基因。其实这个也差不多的。

我认为你转染（瞬时转染）的报告基因质粒虽然不整合到染色体上，但是它是可以进入细胞核的。受到激活的转录因子转运到细胞核内，不仅能激活内源性的基因promoter，也同时会激活瞬时转染进去的这个质粒上的promoter，从而引起他连接的荧光素酶的表达。其实这种质粒的表达一般不会受到染色体的影响。不过由于没有整合到染色体上，所以这种质粒的表达一般只能维持几天的时间，随后会丢失或降解掉。

不知道有没有回答到你的问题？

哦，现在清楚了，我原来以为瞬时转染的质粒只能存在于细胞质中，如果它能进入细胞核，那么这就容易解释了，这几天一直纠结在这个问题上，谢谢您的回答了!看来您在这方面比较在行，我还想请教一个问题，就是在一种真核细胞中同时稳定转染两种报告基因质粒（双荧光素酶报告基因）建立稳定的细胞系的成功几率大吗，就我看的资料没人这样做，一般都是用的瞬时转染？

一种基因的稳定表达细胞做过，但是没有尝试过同时稳定转染两种报告基因质粒建立的细胞系，难度相当的大，我不是很乐观。

我也是觉得难度很大，很谢谢您能这么耐心回答我的问题。

这个问题很有意义啊，我也有收获，谢谢上面两位了

透射电镜观察细胞自噬， 交流扣扣 2441149844