【求助】请教一个关于双荧光素酶报告基因检测系统中共转染两种报告基因质粒的比例的问题？
丁香园论坛
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用双荧光素酶报告基因检测系统进行报告基因检测时需要共转染两种荧光素酶报告基因质粒，但是我不知道两种质粒间的比例是多少，有哪位前辈做过这方面实验的，请帮我指点一下，谢谢了
这个比例没有特别的规定。我用的pRL－TK（海蜃素荧光素酶）的荧光值要高一些，我转20ng/孔（24孔板），作为内参.pGL3（萤火虫荧光素酶）的荧光值低一些，我转0.4ug/孔（24孔板）然后0.4ug的调整质粒。这样的话，萤火虫荧光素酶/海蜃素荧光素酶的比值下来是1.0左右，我觉得变化比较明显。
我用的是PRL-TK ：20ng/孔（24孔板）； PMiR: 80ng/孔 （24孔板） 最后比值控制在两位数，效果也不错。仅供参考
一般可以按这么几种比例来摸索，萤火虫荧光素酶：海肾分别用10:1, 20:1, 50:1, 100:1，论坛里有人用到200:1的，根据转染效率，看测得的读数，前者在万以上，最好几十万，后者在1000-2000左右，但是并不强求是多少的。有的文献里2者的结果比值是个位数，有的文献你就看不出他们的值是多少，用对照组为1，其他组相对对照组的比例来作结果的。
不管2种质粒的比例如何，转染试剂对质粒总量的比例应该是最佳比例。
不管2种质粒的比例如何，转染试剂对质粒总量的比例应该是最佳比例。
共转染的两个质粒上面为何都要加荧光基因呢？以前师兄给的质粒上面一个加了EGFP，一个加了luci，为什么呢？
宁晓辛 wrote:
共转染的两个质粒上面为何都要加荧光基因呢？以前师兄给的质粒上面一个加了EGFP，一个加了luci，为什么呢？
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