【求助】关于脑神经毒性的一个信号通路实验设计（体内和体外，关键是体外），请教中……

拟通过体内外实验证明某化合物的神经毒性（通过Ca2+-CaMKII-CREB途径），设计如下，第一次做这样的实验，真心的、虚心请教各位老师指点
初步设计为：“由氧化应激导致兴奋性氨基酸增加，通过NMDA受体激活钙通道”

1、体内试验
染毒后，取脑海马进行如下检测：
采用邻苯二醛柱前衍生高效液相色谱法检测仔鼠海马兴奋性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)含量；
利用NO和NOS试剂盒测定NO含量和NOS活性；
采用Fura-2荧光探针法检测仔鼠海马细胞内钙离子浓度；
采用磷酸二酷酶法测定仔鼠海马CaM活性；
利用Western blot法测定大鼠脑海马CaMKⅡ蛋白表达水平；
利用RT-PCR法（免疫组化法）测定大鼠海马CaMK II的基因表达水平；
采用Western-blot测定仔鼠海马p-CaMKIV和p-CREB的蛋白表达水平；
采用RT-PCR法测定仔鼠海马c-fos和 BDNF mRNA表达水平。
采用RT-PCR法测定NMDA受体NR1亚单位酪氨酸磷酸化的变化。
2、体外实验
体外原代培养大鼠海马神经元，加入不同浓度的柠檬黄共同孵育后，
2.1采用免疫细胞化学方法（SABC法）检测各组神经元p-CREB和CaMKⅡ蛋白的表达；
2.2RT-PCR法半定量测定CREB下游基因脑源性生长因子(BDNF)的表达；
体外实验，还可增加什么指标？请教老师们哈，谢谢

c-fos，p-CaMKIV，CaM，NMDA受体要不要测？如果需要测，是不是可以和p-CREB、CaMKⅡ同时测定？
关于毒性研究，有没有必要加抑制剂实验？

继续请教中，