【求助】编辑问肿瘤标本miRNA表达情况，该怎么回答
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文章修回编辑问肿瘤标本miRNA表达情况，我该怎么回答，还是补做实验。谢谢！（我只做细胞系相关实验）
我觉得有两个办法：
1。最好的办法当然是去找一些肿瘤组织和正常组织，检测miRNA，这样是最理想的。
2。如果实在弄不到标本，你就引用别人的文献，说明此miRNA在肿瘤标本中的表达情况，并且说明你的实验主要是focus在basic research上面的，这样别人应该可以理解。
1。最好的办法当然是去找一些肿瘤组织和正常组织，检测miRNA，这样是最理想的。
2。如果实在弄不到标本，你就引用别人的文献，说明此miRNA在肿瘤标本中的表达情况，并且说明你的实验主要是focus在basic research上面的，这样别人应该可以理解。
fgh2005 wrote:
文章修回编辑问肿瘤标本miRNA表达情况，我该怎么回答，还是补做实验。谢谢！（我只做细胞系相关实验）
1.抽取肿瘤的总RNA。反转录成cDNA。
2.设计相关miRNA的引物。
3.用realtime PCR检测相关miRNA前体和成熟体的表达情况。选择相应的内参。
非常感谢
霍一刀hxs wrote:
1.抽取肿瘤的总RNA。反转录成cDNA。
2.设计相关miRNA的引物。
3.用realtime PCR检测相关miRNA前体和成熟体的表达情况。选择相应的内参。
不要误导。
提总RNA没有问题，但先反转录成cDNA，再设计引物检测就晚了。
做miRNA是要用特异的套环引物去做逆转的
当然可以几种引物混在一起逆转。
内参基本上没得选，就是U6
zjubell wrote:
不要误导。
提总RNA没有问题，但先反转录成cDNA，再设计引物检测就晚了。
做miRNA是要用特异的套环引物去做逆转的
当然可以几种引物混在一起逆转。
内参基本上没得选，就是U6
相互学习，多谢指教。我的意思是从这几个方面下手。有错误，多指教。呵呵
zjubell wrote:
不要误导。
提总RNA没有问题，但先反转录成cDNA，再设计引物检测就晚了。
做miRNA是要用特异的套环引物去做逆转的
当然可以几种引物混在一起逆转。
内参基本上没得选，就是U6
您的意思是说做miRNA定量PCR的时候，RT一个管子里可以放多个特异的茎环引物一起逆转的吗？这样试剂盒要求的RT体系需要重新改变吗？会不会影响反转录效果呢？
一般公司的试剂盒都可以满足多个miRNA一起逆转率，但如果模板充足，还是建议分开做，很多个引物混一起，有所串扰也很难说。
http://tong.dxy.cn/sirna/index.htm
http://tong.dxy.cn/sirna/index.htm
如果资金许可，找公司做芯片。自己只提供标本，肿瘤组织和正常组织即可。
sherry_fx wrote:
您的意思是说做miRNA定量PCR的时候，RT一个管子里可以放多个特异的茎环引物一起逆转的吗？这样试剂盒要求的RT体系需要重新改变吗？会不会影响反转录效果呢？
是可以混的,但是对于一些family,比如let-7,17-92 cluster等,不建议混在一起,确实会有干扰,比ABI所提供数据的比例要高.
不大明白
在细胞水平研究miRNA的效果也可以吧？ 加miRNA和不加miRNA 细胞的活力 细胞凋亡都应该有变化呀 我的论文也是miRNA治疗白血病方面的 我打算在细胞水平看miRNA的疗效
关于肿瘤的对照问题？ 做胶质瘤用正常脑组织和肿瘤之间对照可行不。实验室做肝癌是用癌和癌旁作对照。胶质瘤疑惑？？？
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