【求助】荧光素酶如何检测某基因为miRNA的靶基因？
丁香园论坛
2509
搜了一下论坛，未果，我想问一下，使用荧光素酶如何检测某基因为miRNA的靶基因？大概是什么样的步骤呢？才接触，也不了解
谢谢！您发的帖子我看到了，您的意思是现在常用的方法就是您帖子上写的吗？我看有的文献说看转了片段的荧光素酶载体的活性，如果活性低说明miRNA与靶基因相互作用，这个和您说的方法是一种吗？
另外，插入片段的psiCHECK2-Dual luciferase reporter vector、microRNA的precursor（Gain of function)和Inhibitors（Loss of function)三者必须都要吗？直接通过共转microRNA的precursor与插入片段的psiCHECK2-Dual luciferase reporter vector，然后看luciferase活性是否降低可以吗？使用Inhibitors是做什么用的呢？
另外，插入片段的psiCHECK2-Dual luciferase reporter vector、microRNA的precursor（Gain of function)和Inhibitors（Loss of function)三者必须都要吗？直接通过共转microRNA的precursor与插入片段的psiCHECK2-Dual luciferase reporter vector，然后看luciferase活性是否降低可以吗？使用Inhibitors是做什么用的呢？
一般就是通过把seed sequence（来自于候选靶基因）克隆在荧光素酶的下游，如果microRNA能够作用于该seed sequence的话，就可以降解该融合mRNA，导致荧光素酶的活性下降，否则不会有什么明显的作用。precursor相当于认为的合成的MicroRNA,因为有时候细胞中的水平很低，而Inhibitor则作用相反，可以抑制天然的MicroRNA的作用。你可以选择本底很低的细胞系共转载体和Precursor，选择本底比较高的共转载体和Inhibitor，当然肯定要设立载体单转和空载体转染的对照作为阴性对照，理论的seed sequence共转作为阳性对照。
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