miRNA靶基因验证，双荧光素酶报告基因实验

我也是，目前还没有找到解决方法

加上的序列片段会通过表达影响的荧光素酶活性。

这种情况可能是由于报告质粒pmir-WT本身存在结合其他蛋白质或RNA的结构，导致其荧光素活性受到影响。也有可能是miR-NC具有一定的非特异性作用，与pmir-WT中的其他序列结合导致其荧光素活性下降。

为了确定问题的原因，可以尝试进行以下实验或措施：

使用不同的靶基因结合位点，验证miR-NC是否也会对其荧光素活性产生影响。如果是，则可以考虑更换报告质粒或靶基因结合位点的设计。

对pmir-WT进行序列分析，确定是否存在其他可能的结合靶点，从而确定miR-NC是否与这些靶点发生相互作用。

对pmir-WT进行mutant构建，将靶基因结合位点进行变异，观察miR-NC对其荧光素活性的影响是否减弱或消失。

鉴定报告质粒是否存在其他问题，例如插入序列长度、序列方向、序列完整性等等。

考虑使用其他检测方法进行验证，例如RNA干扰、西方印迹等方法，以确定miR-NC对靶基因的影响。