【求助】如果要证明Bcl-2和RARP活性，应该做什么实验？

目前有两种化合物，分别为Bcl-2和PARP的抑制剂，

虽然这两个指标通常作为细胞凋亡的指标常用于分子生物实验，

但是，如何证明这两个分子被抑制的实验却第一次碰到，

请各位战友支招，我要直接检测哪个蛋白的WB 或者做什么实验合适？

用western检测bcl-2的含量变化，检测PARP活性裂解片段的含量变化以及原型态PARP的含量变化。

你和我犯的一样的错误，
目前不是看PARP蛋白本身或者bcl-2表达发生了什么变化——这是检测调亡常用的指标。
我现在要做的事检测PARP和bcl-2的活性如何。

欢迎eeflying老师来本论坛交流学习。

关于您的问题，我不知理解的对否，只谈谈自己的浅见：
研究背景和目的：您发现了两个化合物，分别为Bcl-2和PARP的抑制剂，现在想证明这两个分子被抑制了。
拟定方案：首先，您一定很清楚Bcl-2和PARP在凋亡过程中的地位和作用，简言之：bcl-2是发挥抗凋亡作用的bcl-2家族成员之一；PARP是caspase-3引发凋亡的下游效应蛋白。因此，您可以在体外试验中，使用通过下调bcl-2以及活化caspase发挥诱导凋亡作用的化疗药物对培养细胞（乳腺癌细胞？）进行处理，同时设定使用您所说的化合物的干预组进行抗凋亡干预，理论上应该是Bcl-2抑制剂使凋亡率增加，PARP抑制剂使凋亡率下降，同时WB检测bcl-2、caspase-3、parp变化。如果您使用的是Bcl-2抑制剂，那么bcl-2的表达就可能相对更为降低；如果您使用的是parp抑制剂，那么bcl-2依然可能会降低，caspase-3也可能会激活，但parp的活化应该不明显或相对不明显，就可初步得到证实。

我需要的是直接效应实验，
就像EGFR抑制剂可以用磷酸化WB验证一样的直接实验。

检测PARP活性可以应用相关的试剂盒：
http://www.rndsystems.com/rnd_page_objectname_dnadamage.aspx#parp
http://www.rndsystems.com/pdf/4672-096-K.pdf

检测bcl-2活性应用WB跑：
Phosphorylation of Bcl-2
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11368354

Bcl-2有磷酸化形式，可以进行WB检测。

谢谢，我试试