【求助】shRNA表达载体的复制起始点问题
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请问shRNA表达载体在真核细胞中表达,一定要有真核表达的复制起始点么? 如果只有PUC ori ,但是还有U6 启动子,是否就可以在真核细胞中表达shRNA了呢? 这和f1 ori有什么关系么? 由于对这方面了解很少,所以希望广大战友能予以帮助解答,谢谢!
复制起点与启动子层面不同:
PUC复制起点貌似原核复制起点啊,比如你转染前要获得大量的质粒,那么pUC origin 能保证该载体在大肠杆菌中的复制。
U6启动子是确保目的shRNA转录,个人觉得转染的shRNA表达载体应该具有真核复制起点吧?!
网上搜到一种RNAi载体pGO包含的序列:pUC复制起点pUCori、fl复制起点flori、细菌启动子P、卡那霉素基因Kan、HSV-TKPolyA、U6启动子U6promoter 和多克隆位点MCS,其特征在于还含有用于表达绿色荧光蛋白基因的转录元件,包括CMV启动子CMVpromoter、增强绿色荧光蛋白基因EGFP和 SV40PolyA,以及用于表达真核细胞抗性筛选标志的新霉素基因转录元件,包括SV40早期启动子SV40epromoter和新霉素抗性基因Neo。
PS:等高手解释!
PUC复制起点貌似原核复制起点啊,比如你转染前要获得大量的质粒,那么pUC origin 能保证该载体在大肠杆菌中的复制。
U6启动子是确保目的shRNA转录,个人觉得转染的shRNA表达载体应该具有真核复制起点吧?!
网上搜到一种RNAi载体pGO包含的序列:pUC复制起点pUCori、fl复制起点flori、细菌启动子P、卡那霉素基因Kan、HSV-TKPolyA、U6启动子U6promoter 和多克隆位点MCS,其特征在于还含有用于表达绿色荧光蛋白基因的转录元件,包括CMV启动子CMVpromoter、增强绿色荧光蛋白基因EGFP和 SV40PolyA,以及用于表达真核细胞抗性筛选标志的新霉素基因转录元件,包括SV40早期启动子SV40epromoter和新霉素抗性基因Neo。
PS:等高手解释!
非常感谢,我看到很多人用到genscript公司的PRNT2.1-U6 neo这种RNAi载体,但是图谱上一般都只标出PUC ori,却不见真核复制起始点,不知道是不是省略了没标出来?
pl198242 wrote:
非常感谢,我看到很多人用到genscript公司的PRNT2.1-U6 neo这种RNAi载体,但是图谱上一般都只标出PUC ori,却不见真核复制起始点,不知道是不是省略了没标出来?
给技术支持打个电话,问问就行了。呵
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