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【求助】质粒有两个复制起始点,怎么复制呢?(red重组,pKD46质粒)

丁香园论坛

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我现在在做基因敲除,用的是red重组系统,pKD46质粒上携带有敲除所需的蛋白。pKD46质粒上有两个复制起始点Origin of Replication:repA101ts & oriR101 ;repA101ts是温度敏感型复制起始点。

有几个问题请教:
1.大家有用过这个pKD46的吗?oriR101是温度敏感型复制子还是条件诱导型复制子啊,我在网上查到它是温度敏感型复制起始点,我很不理解,为什么已经有一个温度敏感性复制起始点了还要另外加一个温度敏感型的复制起始点呢?我在Ecoliwiki上(http://ecoliwiki.net/colipedia/index.php/pKD46)查到的pKD46是这么描述oriR101的oriR101:conditional replicon,requires Pir in trans for plasmid replciation就是说在有pir基因宿主菌里这个复制起始点才能启动复制。我倒是觉得这个挺有道理能说得通。

2.如果不管它们是什么类型的复制起始点的话,这两个复制起始点同时起作用的话质粒的复制会不会乱啊,是怎么复制的呢?

3.复制起始点有兼容性,这两个复制起始点已经整合到一个质粒上了,是不是谈不上相容不相容的问题了
求助啊,求助,哪位高手随便帮我解释一个问题也行啊。
且不说到底是组成型复制起始点还是诱导型复制起始点还是其他什么什么性复制起始点,你所讲的这两个起始点一个是原核的,一个是真核的,原核的在原核里起作用,真核的在真核里起作用,正所谓《红楼梦》第六十九回所云“井水不犯河水”,你走你的阳光道,我走我的独木桥。
顺便说一下,“质粒不相容”是针对原核生物讲的。
请问bigbang_0_0战友,怎么才能知道复制起始点是原核还是真核的呢?在哪可以查到还是根据经验积累的呢?比如说我想知道repA101ts & oriR101 的信息我应该在哪里查呢?

最后问一个我自己想的问题,如果两个原核的复制起始点在一个质粒上,这个质粒是怎么复制的呢?谢谢!
请问能否出售pKD46?我也在做red。
版主zhujoker留言:
请直接PM楼主,本版谢绝留QQ或者邮件之类的。
请问能否出售pKD46??实验需要
同意楼上的观点~
楼主您好,请问关于pkd46 质粒复制子的问题,你的最后结论是什么?

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师兄微信号:shixiongcoming

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