【求助】急！！！关于ROS信号通路

8218lijing wrote:
如题：请教各位ROS自身的信号通路。想要阻断其信号通路，有什么试剂？
谢谢诸位！

chuckdouble wrote:
要看这个ROS是什么来源的。一般我们认为有２个来源mitochondria和NADPH oxidase。所以通过你的实验设计我们可以选择不同的阻断剂。

Although mitochondria are frequently named the major source of intracellular ROS in recent literature, they are definitely not the only source. Numerous other cellular sources of ROS have been reported, for example, enzymes, such as membrane-bound NADH and NADPH oxidases, xanthine oxidase, eNOS, lipoxygenases, cyclooxygenases, microsomal metabolism of xenobiotics, and peroxisomal β-oxidation of fatty acid .

我们通常实验的时候有很多的anti-oxidant。只不过各自的工作原理不同，上面的战友也提到了NAC，它其实是通过GSH去除ROS.　

N-acetylcysteine (NAC) is not only a GSH precursor but also a direct antioxidant with strong ROS-scavenging effect. As a potent antioxidant, NAC directly scavenges hydrogen peroxide (H2O2), hydroxyl free radicals (OH), and hypochloric acid (HOCl) in vitro (Aruoma et al., 1989). NAC also decreases free radical levels by increasing GSH synthesis (Neuschwander-Tetri et al., 1996; Song et al., 2004).

NADPH oxidase的特异性阻断剂也同样能起到阻断ROS。保护mitochondria的功能，也能起到降低ROS的作用（mitochondria产生的ROS一般被认为是dysfunction 引起的电子的leak引起的）

One of the physiological functions of mitochondria is to generate ROS.Being a source and a sink of ROS at the same time, they “sense” changes in the intracellular metabolic demands, nutrition supply, their own abundance and functional and structural integrity, and the external ROS “pressure,” and “report” the integrated signal back to the cell in the form of the steady-state level of H2O2 set forth by a balance between their H2O2 emission and removal rates .(see the picture below)[

因此，具体使用什么anti-oxidant要看你的实验设计。

Certainly！

doctormy wrote:
:)交流一下，以求共同进步！:)

chuckdouble wrote:

我不清楚这句话的出处.但是一般来说, 我们在讨论source of ROS的时候 不会把上面罗列的enzymes全部考虑进去的. 其中 NADPH oxidase的primary function就是generate ROS 所以是重点考虑的enzyme;其他来源的ROS都是其 byproduct. 而mitochondria的呼吸链中leak出来的ROS量也非常客观,所以也会一起考虑进去.

是的,好久没有用过NAC了, 忘记了其化学属性,刚才查了pubmed, 果然是,,谢谢指出.

这里没有表达清楚, physiological mitochondria来源的ROS, 应该算是basal level的ROS. 我上面想说的是,在pathological 状态下的ROS的增加, 是由于呼吸链的电子传递的障碍引起了电子的leak, 使ROS增加.

交流第一~~,

doctormy wrote:
我上述我所讲的任何一句话都有出处可查，其中第一段的出处为最新的一篇相关综述，非常值得你学习一下。
The role of mitochondria in reactive oxygen species metabolism and signaling. Ann N Y Acad Sci. 2008 Dec;1147:37-52。

科研贵在严谨，做其他事也一样，包括回帖，因为这是大家所希望的，更重要的是会避免很多误导。

愿共同进步！

chuckdouble wrote:
是的, 科研确实要严谨这个我同意, 因为我也是做实验的时候一个结果要做到three experiment后才会去相信结果

但是这位战友的话似乎就是从别人的文章抄出来的, 那么首先如何评价那个论文的作者说的话就一定是对的呢? 毕竟大家都写过论文, 也都投过几分几分的论文. 一个1.7分论文中出来的一段话是否是100%值得相信的呢?(当然, 没有任何对杂志的褒贬之意:D) 如果只是引用一段国外的论文中的一段话就是严谨的话,,.呵呵.

是否以怀疑的目光的看待论文, 才是严谨?

如有冒犯,请多包涵. 我也是为了共同进步.:)

doctormy wrote:
呵呵，看来你还是没有好好学习文献，特别是我推荐你的文献啊。那就再与你共同进步一小下！:D:D

1、首先，如果你看了我推荐的那篇文献后，你就会深刻感受到自己认识的不足在哪里（请恕我直言！！），记住，科技综述一定要看最新的，通过这篇综述你会从参考文献中看到以往的很多相关综述，以此追踪学习。这也是综述最精华的地方。但从你的言谈，看得出来，你根本没有深入地学习。

2、参考文献，顾名思义----仅供参考，我们当然不能全信:)。但你记住，综述中的很多观点通常绝非一家之言。而且，最最重要的是，我所讲的这个观点--即你所指的“从别人的文章抄出来”的话:D:D，其实是个“基础”知识啊（请恕我直言！！），真正研究过ROS的人都应该知晓的。
我之所以用“最新综述”的话来给你解释，是代表我对你的话题的重视，没想到被你误解了。:I:I那好吧，我就按你的口味找篇具有代表性的"老一点"、影响因子“高一点”的文献吧，也是综述哦，你领悟一下！8D:D
This process is mediated by enzymes such as NAD(P)H oxidases and xanthine oxidase or nonenzymically by redox-reactive compounds such as the semi-ubiquinone compound of the mitochondrial electron transport chain.
Free radicals in the physiological control of cell function.Physiol Rev. 2002 Jan;82(1):47-95. IF:29.6(2007)

3、学术交流，何谈冒犯，你说呢？文献很多的，如果你始终认为不正确，可以反驳啊，文献的干活，呵呵，非常欢迎，共同进步嘛！:)

chuckdouble wrote:

Excessive amounts of ROS may arise either from excessive stimulation of NAD(P)H oxidases or from less well-regulated sources such as the mitochondrial electron-transport chain. 你提供的论文中的原话. Free radicals in the physiological control of cell function.Physiol Rev. 2002 Jan;82(1):47-95. IF:29.6(2007)

ROS generation as a byproduct occurs with mitochondria, peroxisomes, cytochrome P-450, and other cellular elements. However, the phagocyte NADPH oxidase was the first identified example of a system that generates ROS not as a byproduct, but rather as the primary function of the enzyme system. 这句话是从下面论文来的 The NOX family of ROS-generating NADPH oxidases: physiology and pathophysiology Physiol Rev. 2007 Jan;87(1):245-313

上面2句话中已经谈到了. 虽然ROS的来源很多, 就和我一开始说的一样, 一般我们实验中寻找通路的时候, major source of ROS的来源主要考虑的是mitochondria 和NADPH oxidase. 而不会把你所罗列的那么多的enzyme都算进去的, 你提到的那些只是理论上的, 就是严格来讲这些个enzyme确实都会产生ROS, 但是当你设计实验, 寻找mechanism的时候 主要考虑的还是mitochondria和NADPH oxidase 来源. 我从一开始就没有否认过那些enzyme不能generate ROS, 不知道我说清楚了没有. 呵呵.

还有关于你上面1中谈到的, 我觉得你似乎误会我的意思了. 我是在看到你从某一个论文直接一字不差的抄出来, 而且其论文的影响因子又那么低,所以提出了疑问. 但是你似乎强调着"最近综述的重要性", 同时让我感受自己认识的不足在哪里（请恕我直言！！）， 呵呵, 最新综述确实很重要, 但是我认为也要注重其质量和作者的, 这个仅仅是我个人读论文的习惯而已.

呵呵,我也不说什么让你领悟一下 或 你根本没有深入地学习 之类的话了...

因为我自己也水平有限, 理解有可能错误的地方, 欢迎指出.

欢迎讨论,交流. 共同进步. 呵呵

doctormy wrote:
对嘛，我的意思就是针对你的话“我们认为有２个来源mitochondria和NADPH oxidase”，现在看来我的目的达到了，我推荐的杂志不错吧，:D:D！起码一个一个帖子看过之后，应该不会再误导别人。
OK，点到为止啦！直言之处，海涵！:)

doctormy wrote:
主要研究过ROS与凋亡的关系（如下图）
阻断试剂中最常用的是NAC、catalase。
应用NAC预处理即可在一定程度上清除刺激因素导致的细胞生成的ROS
理论上，在培养中加入catalase即可降低ROS水平。