【求助】基因合成问题

各位师兄师姐好：

我所做的基因的mRNA的长度为5371bp,能否让公司合成引物，然后再通过PCR得到基因全长。这样能否实现？如果不能，怎样才能得到基因序列？请各位高手指教。谢谢！

长的mRNA的确无论从RNA提取的完整性、反转录上来说都是不小的难度。
建议你分段扩增，然后用“桥接”法扩增出完整的cDNA。现在有的公司推出有长程扩增的PCR试剂，但是我没有用过，不知道扩增数千bp的片段效果怎么样。如果用桥接法扩增几个注意事项和策略如下：
1。RNA提取的质量尽量要好；
2，多合成几对引物，如果你按照1000bp左右的片段扩增可能会好一些，有人说上了2000bp的片段扩增就不好扩增了，这个我不确定，但是片段越长，完整的mRNA存在的纪律可能就小些。
这些引物的要求，1），最好引物之间的Tm值相差不大，每一对上下游引物都可以用来扩增片段；2）扩增的片段之间有相互重叠的部分，这个重叠部分有一两百bp应该就可以了。比如你有六个片段，ABCDEF。可以先分别扩增A B C D E F,然后把A和B混合，在反映体系中加入Taq酶，dNTP等，然后加入A的上游引物和B的下游引物，进行扩增，这样就得到一个较长片段AB，依此扩增出CD、EF，然后把几个片段融合。你也可以先把AB融合片段和C、D、E、F依次融合。

多谢楼上的建议，但我的mRNA也不能通过提取的方法得到，因为他一般情况下不表达的！

那我就糊涂了，一般情况不表达，那怎么叫mRNA？我也很想知道你这mRNA通过什么方法能得到？

我的基因是cyld,是一种肿瘤抑制因子，上一个写错了 ， mRNA在一般情况下不表达。正因为一般不表达， mRNA所以不能提取得到，其基因的cDNA全长只能通过公司合成引物，在PCR!不知道我这样说准确吗？

迷惑，cDNA一般是由mRNA转录而来；我觉得你应该想合成全基因，目前有些公司可以提供全基因合成服务，也就是你所说的合成引物吧，否则，你模板哪里来？

现在弄明白了，我从细胞中提取mRNA（购买试剂盒），然后在通过RT得到cDNA，然后PCR得到基因的 扩增。谢谢楼上的 回答