【求助】求助Ｗestern检测胞核中p６５，需要内参吗，需要的话，选哪种
丁香园论坛
5383
我现在要做nf-kappaＢ的活性，请问，western检测细胞核中的p６５，需内参吗？
用组蛋白 H1、H2等
Lamin A/C
Lamin B
Lamin B
用β-actin可以吗 还想问用什么方法提细胞核啊？
actin是典型的胞质内参，不能用来做核内参。
一般用来做核内参的是组蛋白H1、H2等，或者是laminin。组蛋白的分子量一般较小，可根据需要选择。
另外，如果要检验质核分离的效果，也应该检测质内参actin，如果你所提取的核组分中检测不到actin，说明质核分离效果较好。
提细胞核的方法：
先用低渗缓冲液（hypotonic buffer）悬浮细胞，冰浴10min后加入相应的表面活性剂即可，其中的NP-40（或Triton X-100）的量需要根据细胞种类作一些改变。
低渗缓冲液配方：
10mM Tris-HCl(pH 7.4), 10mM NaCl, 3mM MgCl2.
个别细胞种类所需添加的NP-40（或Triton X-100）的量(每400μl低渗缓冲液)：
HEK293: 3μl, 1%
SK: 4μl, 10%
Hela、CHO: 30μl, 10%
500g离心5min后，沉淀即为细胞核。
如果觉得麻烦，可以去买专用的试剂盒。
一般用来做核内参的是组蛋白H1、H2等，或者是laminin。组蛋白的分子量一般较小，可根据需要选择。
另外，如果要检验质核分离的效果，也应该检测质内参actin，如果你所提取的核组分中检测不到actin，说明质核分离效果较好。
提细胞核的方法：
先用低渗缓冲液（hypotonic buffer）悬浮细胞，冰浴10min后加入相应的表面活性剂即可，其中的NP-40（或Triton X-100）的量需要根据细胞种类作一些改变。
低渗缓冲液配方：
10mM Tris-HCl(pH 7.4), 10mM NaCl, 3mM MgCl2.
个别细胞种类所需添加的NP-40（或Triton X-100）的量(每400μl低渗缓冲液)：
HEK293: 3μl, 1%
SK: 4μl, 10%
Hela、CHO: 30μl, 10%
500g离心5min后，沉淀即为细胞核。
如果觉得麻烦，可以去买专用的试剂盒。
请问斑竹，如果是组织怎么提细胞核啊
thank yoy
嘿嘿,又长见识了
本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴
师兄微信号：shixiongcoming
