【求助】求助Western检测胞核中p65,需要内参吗,需要的话,选哪种
丁香园论坛
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我现在要做nf-kappaB的活性,请问,western检测细胞核中的p65,需内参吗?
用组蛋白 H1、H2等
Lamin A/C
Lamin B
Lamin B
用β-actin可以吗 还想问用什么方法提细胞核啊?
actin是典型的胞质内参,不能用来做核内参。
一般用来做核内参的是组蛋白H1、H2等,或者是laminin。组蛋白的分子量一般较小,可根据需要选择。
另外,如果要检验质核分离的效果,也应该检测质内参actin,如果你所提取的核组分中检测不到actin,说明质核分离效果较好。
提细胞核的方法:
先用低渗缓冲液(hypotonic buffer)悬浮细胞,冰浴10min后加入相应的表面活性剂即可,其中的NP-40(或Triton X-100)的量需要根据细胞种类作一些改变。
低渗缓冲液配方:
10mM Tris-HCl(pH 7.4), 10mM NaCl, 3mM MgCl2.
个别细胞种类所需添加的NP-40(或Triton X-100)的量(每400μl低渗缓冲液):
HEK293: 3μl, 1%
SK: 4μl, 10%
Hela、CHO: 30μl, 10%
500g离心5min后,沉淀即为细胞核。
如果觉得麻烦,可以去买专用的试剂盒。
一般用来做核内参的是组蛋白H1、H2等,或者是laminin。组蛋白的分子量一般较小,可根据需要选择。
另外,如果要检验质核分离的效果,也应该检测质内参actin,如果你所提取的核组分中检测不到actin,说明质核分离效果较好。
提细胞核的方法:
先用低渗缓冲液(hypotonic buffer)悬浮细胞,冰浴10min后加入相应的表面活性剂即可,其中的NP-40(或Triton X-100)的量需要根据细胞种类作一些改变。
低渗缓冲液配方:
10mM Tris-HCl(pH 7.4), 10mM NaCl, 3mM MgCl2.
个别细胞种类所需添加的NP-40(或Triton X-100)的量(每400μl低渗缓冲液):
HEK293: 3μl, 1%
SK: 4μl, 10%
Hela、CHO: 30μl, 10%
500g离心5min后,沉淀即为细胞核。
如果觉得麻烦,可以去买专用的试剂盒。
请问斑竹,如果是组织怎么提细胞核啊
thank yoy
嘿嘿,又长见识了
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