【求助】小鼠体内外源性骨形态发生蛋白的测定
丁香园论坛
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请教各位实验高手，我在做重组人骨形态发生蛋白2（rhBMP-2)的体内缓释实验，实验过程是将复合有rhBMP-2的载体材料植入小鼠四肢肌肉内，定期测定体内rhBMP-2的缓释和表达水平，请问采用什么方法更准确、简便，当初想采用ELISA定期测定小鼠外周血清，但有人说小鼠该蛋白与人有较强的同源性，测定值包含有自身BMP，那么如何将内源性和外源性区别开呢。另外，复合rhBMP-2载体材料植入区软组织的该蛋白的表达和定量用组织匀浆ELISA法还是免疫组化或者RT-PCR法，哪种方法更能说明问题，谢谢！
那么如何将内源性和外源性区别开呢？
找一种单抗，只针对人的表位，与鼠的BMP-2没有交叉。
哪种方法更能说明问题?
前两个是蛋白水平，RT-PCR是基因水平。三个试验研究角度不同，说明的问题也不同，如果有条件都做一做。
这个试验是用质粒表达蛋白吗？如果是这样的话，基因水平是必须的，所以RT-PCR必须做。
如果你的目的是研究rhBMP-2的缓释，只有做血清的ELISA定期测定才能说明问题。
找一种单抗，只针对人的表位，与鼠的BMP-2没有交叉。
哪种方法更能说明问题?
前两个是蛋白水平，RT-PCR是基因水平。三个试验研究角度不同，说明的问题也不同，如果有条件都做一做。
这个试验是用质粒表达蛋白吗？如果是这样的话，基因水平是必须的，所以RT-PCR必须做。
如果你的目的是研究rhBMP-2的缓释，只有做血清的ELISA定期测定才能说明问题。
谢谢，我的目的就是观察缓释，不是质粒表达蛋白，只是单纯的高分子材料载体复合蛋白，看来只有用ELISA法了，不过我想测定一下植入材料局部组织的蛋白表达的话，是否应该再做一下免疫组化。问的问题比较菜，见笑啊。
baifeng1979 wrote:
谢谢，我的目的就是观察缓释，不是质粒表达蛋白，只是单纯的高分子材料载体复合蛋白，看来只有用ELISA法了，不过我想测定一下植入材料局部组织的蛋白表达的话，是否应该再做一下免疫组化。问的问题比较菜，见笑啊。
你这个试验，蛋白是外源性的，不是组织表达的，RT和组化都不用做。
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