骨源性碱性磷酸酶的测定及注意事项
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第二步是BAP与血浆中其它组分，包括其它来源的碱性磷酸酶(ALP)分离达到特异测定BAP的目的。这一目的实现是根据小儿型BAP(NBAP)和成人BAP(ABAP)分子结构中糖基类型的不同，分别选择相应的亲和素，我们可称之为NBAP-结合蛋白和ABAP-结合蛋白，预先固相在反应膜的特定区域—反应区上。
当血浆经过此区域渗滤时，BAP即被结合，而其它组成滤过或被滴加的洗涤液清洗掉，从而完成特异性亲和反应。
第三步方可进行BAP的活性测定显色反应。反应膜固定在反应滑板上，待亲和反应完成后，将反应滑板推动，使反应膜到达反应孔正中，将显色液滴加到反应孔内的反应膜上，在37℃反应一定时间，酶促反应显色的深浅与BAP活性成正比，对照说明书上的标准色板目测判读BAP活性。
作为干化学分析技术，结果判断是对照标准板目测做出的半定量分析。
其中，标准色板的色阶印刷在说明书上，不同批次的产品使用同一标准色板，如何使每批次的产品使用同一标准色板， 如何使每批产品酶促显色的深浅都能与标准色板一致呢?这是通过每批产品出厂前的校正实现的。
校正是用已知NBAP(活性为200U／L，250U／L，300U／L)和ABAP(活性为150U／L，200U／L，250U／L)的血清(17µl)进行的，在37℃进行反应，使显色强度与标准色板上相应色强相一致，确定所需的反应时间为每批产品说明书上填写的反应时间(多少分钟)。
可见，在影响酶促反应的诸多因素(底物种类和浓度、缓冲液种类和浓度、PH值、反应温度、激活剂等辅助因子)一定的前提下，样品中BAP催化反应产物的多少(显色强度)只决定于反应时间的长短。
从上述校正过程可见，欲使测定结果可靠而且重复性好，需要严格掌握的操作环节，一是反应温度应控制在37℃±0．1℃范围内；二是反应时间严格按照说明书上给定的时间；三是如果不用全血分析，直接用血清作为样品分析时，应定量加人 17µl 。
另外，对照说明书上的每步操作，BAP活性测定的质量控制还应包括：
第1步：在反应装置的加样孔中，均匀滴加两滴洗涤液。待其渗入，目的在于加随后的全血样品滴加后渗滤顺利，血球和血浆分离较快，其渗入一般较快，如渗入缓慢，可用手轻压一下血浆分离器，即可迅速渗入。
如漏加洗涤液，则有可能使样品血浆分离缓慢且不均匀，将影响下一步亲和反应及显色反应，最后人为地使显色斑点均一性差。
第2步：试剂盒要求使用新鲜全血，不能使用抗凝血。因某些抗凝剂会抑制BAP的活性。采血时试剂盒是配套的30µl定量采血管，手持有黄线的一端，用另一端吸取血液标本恰好至黑色刻度线，然后用吸球迅速将其均匀加入加样孔中，注意勿产生气泡。如用血清分析，则需加17／J 1。加样后，血液一般在30秒内可全部渗入。如渗透较慢，可用手轻压一下分离器。
第3步：待血液全部渗入后，再逐滴加入两滴洗涤液。由于此时膜表面已截留了血球。所以此时洗涤液渗滤较慢，一般约需1—2分钟。如个别又出现渗入较慢的，也可用手轻压分离器，即可加快渗入速度。
第4步：待洗涤液渗入后，此时样品中血浆已完全转运到亲和膜上，将血浆分离器从反应装置上取下，即可见反应滑板上的圆形反应膜。注意膜上不能附着有其它膜片，如有可能为分离器上的过渡膜松动脱落而成，此时应用镊子或分离器一角将其挑去。
第5步：为了除去血浆中其它物质的干扰，在反应膜上只保留BAP结合蛋白复合物，在反应膜上再滴加两滴洗涤液(小儿型)或中止液(成人型)，此时液体渗入较快。
第6步；推动反应滑板，使反应膜定位在反应孔的正中，此步骤使亲和反应和酶促显色反应在两个不同的区域进行，以避免亲和反应对显色反应的干扰，提高检测灵敏度和特异性。
第7步；在反应孔正中滴加一滴显色液，置37℃恒温水浴箱中按说明书上标明的反应时间进行保温反应。滴加显色剂时，应先将显色剂平衡至室温。
注意：反应温度指的是水浴箱内的气温，而非水的温度；且反应装置应放在试管架或别的支架上，切勿将反应装置放在水中进行反应，放时也要注意避免反应膜上溅上水滴。
显色液正常的颜色为淡黄色，在2-8℃避光条件下可稳定一年，如变蓝或变成无色，可能是运输过程中外界因素的影响所致，对检测结果有一定影响，请勿使用并及时与供应商或公司技术服务部门联系。
第8步：显色结束后，将反应滑板推回原位，此时反应膜上剩余的显色液将会被吸收掉，之后滴加一滴中止液，停止酶促显色反应。因为显色反应时间已经出厂前校正确定，故实际显色时间与说明书上标明的显色时间应尽可能接近。
第9步：试剂盒使用的显色系统是BCIP／INT，显色产物是一种蓝紫色色淀。正常小儿血浆BAP活性一般≤200U／L,~E常成人血浆BAP活性一般≤150U／L，钙营养不良者血浆中BAP活性升高，随钙缺乏程度不同，反应膜上显色强度不同。报告时，对照标准色板报告：
小儿：≤200U／L，250U／L，300U／L。如显色偏离标准色板标明的数值，则可据目测实际报告为200-250U／L,250-300U／L或>300U／L；
成人：≤150U／L，200U／L≤200U／L。如显色偏离标准色板标明的数值，则可据目测，实际报告为150-200U／L，200-250U／L或>250U／L。
