上皮细胞培养
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上皮细胞包括腺上皮是很多器官如肝、胰、乳腺等的功能成分,又由于癌起源于上皮组织,故上皮细胞培养特别受到重视。但上皮细胞培养中常混杂有成纤维细胞,培养时生长速度往往超过上皮细胞,并难以纯化,同时上皮细胞难以在体外长期生存,因此纯化和延长生存时间是培养关键。
体内上皮细胞生长在胶原构成的基膜,因此培养在有胶原的底物上可能利于生长,另外人或小鼠表皮细胞培养在以 3T3 细胞为饲养层(用射线照射后)时,细胞易生长并可发生一定程度的分化现象。降低 PH 、 Ca2+ 含量和温度,向培养基中加入表皮生长因子,均有利于表皮细胞生长。
以表皮细胞为例,用皮肤表皮和真皮分离培养法可获得纯上皮细胞,其法如下(黑木凳志夫 1981 )
1 、取材:外科植皮或手术残余皮肤小块,早产流产儿皮肤更好,取角化层薄者,切成 0.5 - 1 平方厘米小块。
2 、置 0.02%EDTA 中,室温, 5 分钟。
3 、换入 0.25% 胰蛋白酶中, 4 ℃过夜。
4 、分离:取出皮块,用血管钳或镊子将表皮与真皮层分开。
5 、取出表皮,剪成更小的块后,置 0.25% 胰酶中, 37 ℃, 30 ― 60 分钟。
6 、反复吹打,制成悬液。
7 、培养:用 80 目不锈钢纱网滤过后,低速离心,吸去上清。
8 、直接加入培养基( Eagle 加 20% 小牛血清)制成细胞悬液,接种入培养瓶, CO2 温箱培养。