细胞培养过程中的注意事项及试剂配制

三. 器械的清洗和消毒

玻璃器械洗消：

(1) 新的玻璃器皿的洗消：

1. 自来水刷洗，除去灰尘。

2. 烘干、泡盐酸：烤箱中烘干，然后再浸入5 ％稀盐酸 中12 小时以除去脏物、铅、砷等物。

3. 刷洗、烘干：12 小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干。

4. 泡酸、清洗：用清洁液（重铬酸钾120g ：浓硫酸200ml ：蒸馏水1000ml ）浸泡12 小时，然后从酸缸内捞出器皿用自来水冲洗15 次，最后蒸馏水冲洗3-5 次和用双蒸水过3 次。

5. 烘干、包装：洗干净后先烘干，然后用牛皮纸（油光纸）包装。

6. 高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内盖好盖子，打开开关和安全阀，当蒸气成直线上升时，关闭安全阀，当指针指向15 磅时，维持20-30 分钟。

7. 高压消毒后烘干

(2) 旧的玻璃器皿的洗消：

1 ．刷洗、烘干：使用过的玻璃器皿可直接泡入来苏尔液或洗涤剂溶液中，泡过来苏尔溶液（洗涤剂）的器皿要用清水刷洗干净，然后烘干。

2. 泡酸、清洗：烘干后泡入清洁液（酸液），12 小时后从酸缸内捞出器皿立即用自来水冲洗（避免蛋白质干涸后粘附于玻璃上难以清洗），再用蒸馏水冲洗3 次。

3. 烘干、包装：洗干净的器皿烘干后取出用牛皮纸（油光纸）等包装，以便于消毒储存及防止灰尘和再次被污染。

4. 高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内，盖好盖子，打开开关和安全阀，随着温度的上升安全阀冒出蒸气，当蒸气成直线冒出3-5 分钟后，关闭安全阀，气压表指数随之上升，当指针指向15 磅时，调节电开关维持20-30 分钟即可。（玻璃培养瓶消毒前可将胶帽轻轻盖上）

5. 烘干备用：因为高压消毒后器皿会被蒸气打湿，所以要放入烤箱内烘干备用。

金属器械洗消：

金属器皿不能泡酸，洗消时可先用洗涤剂刷洗，后用自来水冲干净，然后用75 ％酒精擦拭，再用自来水，然后用蒸馏水冲洗，再烘干或空气中晾干。放入铝制盒内包装好在高压锅内15 磅高压（30 分钟）消毒，再烘干备用。

橡胶和塑料：

橡胶和制品通常处理方法是：先用洗涤剂洗刷干净，再分别用自来水和蒸馏水冲干净，再用烤箱烘干，然后根据不同品质进行如下的处理程序：

1 . 针式滤器帽不能泡酸液, 用NaOH 泡6-12 小时, 或者煮沸20 分钟, 在包装之前要装好滤膜两张，安装滤膜时注意光面朝上( 凹向上) ，然后将螺旋稍微拧松一些，放入铝盒中在高压锅内15 磅30 分钟消毒，再烘干备用。注意在超净台内取出使用时应该立即将螺旋旋紧。

2. 胶塞烘干后用2 ％氢氧化钠溶液煮沸 30 分钟（用过的胶塞只要用沸水处理30 分钟），自来水洗净，烘干。然后再泡入盐酸液30 分钟，再用自来水，蒸馏水，三蒸水洗净，烘干。最后装入铝盒内高压消毒，烘干备用。

3. 胶帽，离心管帽烘干后只能在2 ％氢氧化钠溶液中浸泡 6-12 小时（切记时间不能过长），自来水洗净，烘干。然后再泡入盐酸液30 分钟，再用自来水，蒸馏水，三蒸水洗净，烘干。最后装入铝盒内高压消毒，烘干备用。

4. 胶头可用75 ％酒精浸泡5 分钟，然后紫外照射后使用即可。

5. 塑料培养瓶，培养板，冻存管：

6. 其他消毒方法：有的物品既不能干燥消毒，又不能蒸气消毒，可用70 ％酒精浸泡消毒。塑料培养皿打开盖子，放在超净台台面上，直接暴露在紫外线下消毒。也可用氧化乙烯消毒塑料制品，消毒后需要用2―3 周时间洗除残留的氧化乙烯。用20000―100000rad 的r 射线消毒塑料制品效果最好。

为了防止清洗器材已消毒与末消毒发生混淆，可在纸包装后，用密写墨水作好标记。其法即用沾水笔或毛笔沾以密写墨水，在包装纸上作一记号，平时这种墨水不带痕迹，一经高温，即出现字迹，从而可以判定它们是否消毒。密写墨水的配制：氯化钻(CoC1₂ ・6H₂ o)2g ，30 ％盐酸10m1 ，蒸馏水88m1 。

注意事项：

1. 严格执行高压锅的操作规程：高压消毒时，先检查锅内是否有蒸馏水，以防高压时烧干，水不能过多因为其将使空气流畅受阻，会降低高压消毒效果。检查安全阀是否通畅，以防高压时爆炸。

2. 安装滤膜时注意光面朝上：注意滤膜光滑一面是正面，要朝上，否则起不到过滤的作用。

3. 注意人体的防护和器皿的完全浸泡：A. 泡酸时要戴耐酸手套，防止酸液溅起伤害人体。B. 从酸缸内捞取器皿时防止酸液溅到地面，会腐蚀地面。C. 器皿浸入酸液中要完全，不能留有气泡，以防止泡酸不彻底。