细胞培养过程中的注意事项及试剂配制

一. 常用设备

准备室的设备：

单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。

配液室的设备：

扭力天平和电子天平（称量药品）、PH 计（测量培养用液PH 值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。

培养室的设备 ：

液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（-80℃ ）、空调、二氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。必须放在无菌间的设备 ：离心机（收集细胞）、超净工作台、倒置显微镜、CO₂ 孵箱（孵育培养物）、水浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃ 冰箱（放置serum 和培养用液）。

二. 无菌操作

无菌室的灭菌：

1. 定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后用3‰ 来苏尔或者新洁尔灭或者0.5 ％过氧乙酸 擦拭。

2.CO₂ 孵箱（培养箱）灭菌：先用3‰ 新洁尔灭擦拭，然后用75 ％酒精擦拭或者0.5 ％过氧乙酸，再用紫外灯照射

3. 实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30 分钟

4. 实验后灭菌：用75 ％酒精（3‰ 新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。

实验人员的无菌准备 ：

1. 肥皂洗手。

2. 穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋

3. 用75 ％酒精棉球擦净双手。

无菌操作的演示：

1. 凡是带入超净工作台内的酒精、PBS 、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75 ％酒精擦拭瓶子的外表面

2. 靠近酒精灯火焰操作。

3. 器皿使用前必须过火灭菌

4. 继续使用的器皿（如瓶盖、滴管）要放在高处，使用时仍要过火。

5. 各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。如吸管不能碰到废液缸。

6. 吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。