免疫组化Elivison二步法操作步骤

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1、石蜡切片置于60℃烘箱中，烘片2h，脱蜡至水，用pH7.4的PBS 冲洗三次，每次3min(3×3')。

2、取一定量PH6.0柠檬酸盐缓冲液，加入微波盒中，微波加热至沸腾，将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，中档微波处理10min，取出微波盒流水自然泠却，从缓冲液中取出玻片，先用蒸馏水冲洗两次，之后用PBS 冲洗2×3'。(注：不是所有的抗体都需要微波修复的，视具体情况而定)

3、每张切片加1滴3% H2O2，室温下孵育10min，以阻断内源性过氧化物酶的活性。PBS 冲洗3×3'。

4、除去PBS 液，每张切片加1滴相应的第一抗体(相应稀释倍数)，室温下孵育2小时。

5、PBS 冲洗3×5'。除去PBS液，每张切片加1滴聚合物增强剂(试剂A)，室温下孵育20分钟。PBS冲洗3×3'。

6、除去PBS液，每张切片加1滴酶标抗鼠/兔聚合物(试剂B)，室温下孵育30min。PBS冲洗3×5'。

7、除去PBS液，每张切片加1滴新鲜配制的DAB液，显微镜下观察5min。

8、苏木素复染，0.1%HCl分化，自来水冲洗，蓝化。

9、切片经梯度酒精脱水干燥(由低浓度到高浓度)，二甲苯透明，中性树胶封固，晾干后观察。