采用Trizol 溶液提取细菌总RNA
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实验原理
实验试剂
实验设备
实验材料
实验步骤
(1)挑取工程菌单菌落，培养至稳定期，取菌液 3 mL 离心得菌体于1.5 mL离心管；
(2)每管加入 1 mL Trizol 溶液，盖紧管盖，激烈振荡15 s，室温静置5 min；
(4)取上清转入（约 1 mL）新的 1.5 m L离心管中；
(5)每管加入 0.2 mL 的氯仿（0.2 体积 Trizol），盖紧盖，剧烈振荡 15 s；
(8)小心吸取上层水相，转入另一新的 1.5 mL 离心管，测量其体积；
(12)小心吸取上层水相，转入另一已编号新的 1.5 mL 离心管；
(13)加入 0.5 mL 的异丙醇（0.5 体积 Trizol），轻轻颠倒混匀；
(15)4℃，12000 g，离心 10 min，RNA 沉于管底；
(16)小心吸去上清，加1 mL75%的乙醇（预冷），并轻柔颠倒，洗涤沉淀；
(18)小心弃上清，微离，吸去剩余乙醇，室温干躁 10 min；
(19)各管用 50 μL DEPC 处理过的双蒸去离子水溶解，55-60℃温育5 min，分装，-80℃贮存（可贮存5周）；
RNA 浓度（µg/µL）= OD260 × 稀释倍数（200）× 40（µg/mL）/1000
纯 RNA 样品的 OD260 /OD280 比值为 1.8~2.0，若低于该值，表明存在蛋白质污染，可重新用酚∕氯仿抽提。该值为 2.0 时，RNA 纯度为最高。
(3)插入适当的梳子，将温热的凝胶倒入胶模中，凝胶厚度为 3~5 mm，置于室温下凝固（约 30 min）;
(4)待凝胶凝固后，小心移去梳子，将凝胶置于电泳槽中，加入电泳缓冲液，使液面高出凝胶 1~2 mm;
(5)用微量移液器将样品与上样缓冲液混合并将混合液小心加入上样孔内，同时加入合适分子量范围的 DNA 分子量标准作为对照;
(6)盖上电泳槽盖，调节电压 100 V，电泳 40 min 左右;
(7)电泳完毕后将凝胶置于紫外透射检测仪上观察结果，用凝胶成像系统照相保存。
注意事项
2. 一般RNA电泳应该是做甲醛变性电泳，但是一般的琼脂糖电泳也可以，需要上样量稍微大些，并且跑电泳的时间越短越好（这样也是为了减少外界RNAse对RNA的降解），跑完电泳立刻观察。
