胃癌三种细胞株（MGC-803、BGC-823、SGC-7901）的培养

我做的是胃癌三种细胞株MGC-803,BGC-823以及SGC-7901的培养，具体方法步骤如下

1）细胞传代：

A将复苏长满细胞的培养瓶中培养基吸出,加3ml 0.86%生理盐水洗涤两次,弃去洗涤液,加0.25%胰蛋白酶1-1.5 ml,消化液均匀覆盖细胞表面,消化时间约1-3分钟。

B消化后在倒置显微镜下可见细胞皱缩变圆,边缘折光性增强,在细胞尚未脱落时倒掉消化液,立即加入血清或含血清的培养基,终止消化。

C 用吸管将培养瓶壁上的细胞吹打下来, 1000 rpm/分钟，离心5分钟,弃去培养基,加入含10%FBS的RPMI-1640培养液6ml,吹打混匀, 视细胞密度以1:2或1:3分瓶培养,当细胞长满培养瓶且形成致密单层时即可再传代。

2） 细胞冻存：

A取在培养瓶内已经生长2－3天形成单层的细胞，最好在冻存前一天换液，以保证细胞处于良好的营养状态。

B 用胰蛋白酶消化细胞，计数，1000 rpm/分钟，离心10分钟。

C 弃去上清，用配好的冻存培养基重新悬浮细胞并配成浓度为106 细胞/ ml的细胞悬液。

D 用吸管轻轻吹打使细胞均匀，按1 ml的量分装入无菌冻存管内。

E 然后将标记好的冻存管放入－20℃，2小时后放入－80℃过夜，次日放入液氮中。

3） 细胞复苏：

A从液氮罐中取出一冻存管的细胞,迅速放入37℃水中,使之基本融化,那入超净台,吸出细胞放入5ml含10%FBS的RPMI-1640培养液的离心管,1000 rpm/分钟，离心5分钟。

B弃去培养基,加入含10%FBS的RPMI-1640培养液6ml,吹打混匀,分装成两瓶,放入在37℃、5% CO2,饱和湿度的培养箱中培养。

C 24小时更换培养基一次,待细胞融合时用0.25%胰蛋白酶消化传代,取3-4代的细胞实验用

以上细胞都是贴壁细胞