冷凝集实验知识及操作步骤

一、概念与临床意义

冷凝集实验主要用于由肺炎支原体引起的原发性非典型性肺炎的辅助诊断。参考值：凝集价≤1：32；临床意义：由肺炎支原体感染引起的原发性非典型性肺炎患者的血清中常含有较高的寒冷红细胞凝集素，简称冷凝集素，它能与患者自身红细胞或“O”型人红细胞于4℃条件下发生凝集，在37℃时又呈可逆性完全散开。75％的支原体肺炎病人，于发病后第二周血清中冷凝集素效价达1：32以上，一次检查凝集价>1：64或动态检查升高4倍以上时，有诊断意义。

二、实验操作步骤

玻璃试管10支，分别加入生理盐水200微升，第一支加入待测血清200微升，混匀后取出200微升加入第二支试管，依次倍比稀释到第九支试管，取出200微升弃去；同时准备好2%“O”型红细胞500微升，操作离心后“O”型红细胞用生理盐水洗涤3次，取离心洗涤后的红细胞100微升加入4.9毫升的生理盐水中即可。最后加入200微升配好的红细胞到10支试管中，混合后放入4℃冰箱中3小时后判断凝集现象。

三、冷凝集实验相关知识

1、多数正常人体内都有低效价的自身冷凝集素，但效价低，反应温度范围也小，无临床意义。

2、有临床意义的自身冷凝集素一般有高效价和反应温度范围高的特点，可致自身免疫性溶血，如CAS.它的发生可能是急性或慢性的。急性常继发于淋巴组织增生如淋巴瘤或肺炎支原体感染；慢性的常在老年人中发生。天气冷时可发生雷诺现象和血红蛋白尿。

3、冷反应性自身冷凝集素通常是IgM，当外周循环温度比较低时，结合到红细胞上，并且使得补体致敏红细胞。当红细胞循环回到温暖部位时，IgM从红细胞上放散下来，但是补体被保留着。在循环红细胞上出现的补体成分是C3，有些是C4.所以在几乎所有的病例中，补体是红细胞上唯一要测定的蛋白。

4、在极少的病例中冷反应性自身抗体是IgG，它可能不结合补体。如果在DAT的所有阶段在冷条件下进行，使用冷盐水和冷抗球蛋白试剂，否则IgG可能被遗漏掉。

5、自身冷抗体的特异性可能是抗-HI、抗-I、抗-i，罕见抗-Pr或其他(Gd，SdX)特异性。