大鼠新生鼠灌注取脑及后固定规则(SOP)

关键词：大鼠 新生鼠 灌注取脑 后固定

目的： 完整取出鼠脑及后期固定

操作步骤

流程：1)麻醉 2)开胸 3)心脏解剖 4)生理盐水冲水 5)4%多基甲醛固定 6)取脑 7)保存或切片.

1 多聚甲醛的配置：

一般方法为：4％多聚甲醛PBS缓冲液配法：称取40g PFA溶于装有800ml PBS的玻璃容器（烧杯或烧瓶）中，持续加热磁力搅拌至60～65℃，使成乳白色悬液。用1.0mol/L的NaOH值至7.0，使呈清亮状（滴加），过滤后定容至1000ml，室温或4℃保存备用。

2 实验准备：准备两个10ml注射器，剪刀，弯镊、PBS 10ml/只、4%PFA 10ml/只。

3 麻醉后开胸：因老鼠较小，可冰冻麻醉，或者用致死量麻醉。沿肋弓下向左右剪开，至双侧腋中线向上剪开，然后向上翻起胸壁，充分暴露心脏。

4 心脏穿刺：在右心耳处用针扎出一个小孔，用装有PBS针筒在左心室进行穿刺。

5 灌流：缓慢灌注PBS 10ml，见到老鼠两前肢及两肺变白可改灌注多聚甲醛，多聚甲醛的灌流也同PBS。

6 灌注成功的标志：刚开始灌注时老鼠剧烈抽动；成功后老鼠后肢绷直，尾部竖起成一直线；所灌注的脑组织白而硬。

7 取脑：分离除去后颈部肌肉 ，用弯镊小心取出脑组织。

8 后固定：灌流后的脑组织置于4％PFA置4度冰箱内进行后固定，时间>2h，过夜最好。

优点：可用单人用注射器直接完成，不用输液管架，而且平均每只仅需5～10ml固定液，时间也仅为5～10min。