RFLP-PCR简介
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概述
CAPs(cleaved amplification polymorphism sequence-tagged sites)CAPs技术又称为PCR-RFLP,限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)技术。是用特异设计的PCR引物扩增目标材料时,由于特定位点的碱基突变、插入或缺失数很少,以至无多态出现,往往需要对相应PCR扩增片段进行酶切处理,以检测其多态性。CAPs标记在二倍体植物研究中可发挥巨大的作用,是PCR标记的有力补充。但在多倍体植物中的应用有一定的局限性。另外,CAPs标记需使用内切酶,这又增加了研究成本,限制了该技术的广泛应用。
原理
PCR-RFLP的基本原理是用PCR扩增目的DNA,扩增产物再用特异性内切酶消化切割成不同大小片段,直接在凝胶电泳上分辨。不同等位基因的限制性酶切位点分布不同,产生不同长度的DNA片段条带。此项技术大大提高了目的DNA的含量和相对特异性,而且方法简便,分型时间短。
基本流程
1. 根据基因名称查询序列,设计引物。
2. 提取基因组DNA。
3. PCR扩增。
4. 产物酶切,凝胶电泳。
优点
这种方法与RFLP相比,不同的是以扩增替代了酶切, 避免了RFLP繁琐的DNA酶切、转移、杂交等步骤。