质粒DNA的提取、酶切与鉴定

1. DNA 琼脂糖凝胶电泳

① 琼脂糖凝胶的制备：称取0.6g 琼脂糖，置于三角瓶中，加入50 mL TBE 缓冲液，经沸水浴加热全部融化后，取出摇匀，此为1.2%的琼脂糖凝胶。

② 胶板的制备：取橡皮膏（宽约1cm）将有机玻璃板的边缘封好，水平放置，将样品槽板垂直立在玻璃板表面。将冷却至65℃左右的琼脂糖凝胶液，小心倒入凝胶液，使胶液缓慢展开，直到在整个玻璃板表面形成均匀的胶层，室温下静置30 min，待凝固完全后，轻轻拔出样品槽模板，在胶板上即形成相互隔开的样品槽。用滴管将样品槽内注满TBE缓冲液以防止干裂，制备好胶板后立即取下橡皮膏，将胶板放在电泳槽中使用。

③ 加样：用微量加样器将上述样品分别加入胶板的样品小槽内。每次加完一个样品，要用蒸馏水反复洗净微量加样器，以防止相互污染。

2. 电泳

加完样品后的凝胶板，立即通电。样品进胶前，应使电流控制在20mA，样品进胶后电压控制在60~80V，电流为40~50 mA。当指示前沿移动至距离胶板1~2cm 处，停止电泳。

3. 染色

将电泳后的胶板在EB 染色液中进行染色以观察在琼脂糖凝胶中的DNA 条带。

结果与观察

在波长为254nm 的紫外灯下，观察染色后的电泳胶板。DNA 存在处显示出红色的荧光条带

4. DNA 琼脂糖凝胶电泳

① 琼脂糖凝胶的制备：称取0.6g 琼脂糖，置于三角瓶中，加入50 mL TBE 缓冲液，经沸水浴加热全部融化后，取出摇匀，此为1.2%的琼脂糖凝胶。

② 胶板的制备：取橡皮膏（宽约1cm）将有机玻璃板的边缘封好，水平放置，将样品槽板垂直立在玻璃板表面。将冷却至65℃左右的琼脂糖凝胶液，小心倒入凝胶液，使胶液缓慢展开，直到在整个玻璃板表面形成均匀的胶层，室温下静置30 min，待凝固完全后，轻轻拔出样品槽模板，在胶板上即形成相互隔开的样品槽。用滴管将样品槽内注满TBE缓冲液以防止干裂，制备好胶板后立即取下橡皮膏，将胶板放在电泳槽中使用。

③ 加样：用微量加样器将上述样品分别加入胶板的样品小槽内。每次加完一个样品，要用蒸馏水反复洗净微量加样器，以防止相互污染。

5. 电泳

加完样品后的凝胶板，立即通电。样品进胶前，应使电流控制在20mA，样品进胶后电压控制在60~80V，电流为40~50 mA。当指示前沿移动至距离胶板1~2cm 处，停止电泳。

6. 染色

将电泳后的胶板在EB 染色液中进行染色以观察在琼脂糖凝胶中的DNA 条带。

五、结果与观察

在波长为254nm 的紫外灯下，观察染色后的电泳胶板。DNA 存在处显示出红色的荧光条带。