血清总补体溶血活性(CH50)测定
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绵羊红细胞(SRBC),与相应抗体(溶血素)结合后,可激活待检血清中的补体而导致SRBC溶血。其溶血程度与血清中补体的含量和功能有关。由于补体含量与溶血程度之间呈正相关,但不是直线关系,而呈S曲线关系,故通常取反应曲线中间部位即50%溶血(CH50)为判定终点。由于抗原抗体复合物激活的是补体的经典途径,C1~9任何一种成分缺陷都可使CH50降低,所以此实验反映了总补体的活性。
材料
磷酸缓冲盐水(pH7.4 PBS)、2%绵羊红细胞、溶血素(2单位)、待检血清、小试管、吸管、37℃水浴箱等。
方法
1、标准曲线的制备
(1)2%血红素溶液配制 吸取5m1 2%绵羊红细胞悬液加入离心管中,2000rpm离心5分钟,去除上清,加蒸馏水2.5m1,待羊红细胞溶解后,再加1.7%NaCl溶液2.5m1,混匀,即为2%血红素溶液;
(2)取小试管11支,按表1分别加入各成分;
(3)混匀后2000rpm离心5分钟,取上清用分光光度计(波长540nm)测光密度值;
(4)以光密度值为纵坐标,溶血%为横坐标,绘出标准曲线。
2、待检血清测定
(1) 取病人血清0.1ml,加PBS 3.9ml,使成1:40稀释,混匀后分装4个小试管,每管1ml;
(2) 加2单位溶血素,每管lml;
(3) 加2%绵羊红细胞,每管lml;
(4) 37℃水浴30分钟;
(5) 2000rpm离心5分钟;
(6) 取上清液测光密度值(540nm波长)。
试管号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 |
2%血红素(ml) | —— | 0.1 | 0.2 | 0.3 | 0.4 | 0.5 | 0.6 | 0.7 | 0.8 | 0.9 | 1.0 |
2%SRBC(ml) | 1.0 | 0.9 | 0.8 | 0.7 | 0.6 | 0.5 | 0.4 | 0.3 | 0.2 | 0.1 | —— |
PBS(ml) | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 |
溶血% | 0 | 10 | 20 | 30 | 40 | 50 | 60 | 70 | 80 | 90 | 100 |
结果
按下法计算每ml待检血清中的补体含量 (计算4管的平均值)。
例: 病人血清稀释度1:40,测得光密度值为0.48 (平均值),自标准曲线查出溶血%为60,则: 40:X = 50:60;X=40×60÷50=48(单位/ml)。
此结果主要反映通过经典途径活化的总补体的活性。