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血清总补体溶血活性(CH50)测定

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绵羊红细胞(SRBC),与相应抗体(溶血素)结合后,可激活待检血清中的补体而导致SRBC溶血。其溶血程度与血清中补体的含量和功能有关。由于补体含量与溶血程度之间呈正相关,但不是直线关系,而呈S曲线关系,故通常取反应曲线中间部位即50%溶血(CH50)为判定终点。由于抗原抗体复合物激活的是补体的经典途径,C1~9任何一种成分缺陷都可使CH50降低,所以此实验反映了总补体的活性。

材料

磷酸缓冲盐水(pH7.4 PBS)、2%绵羊红细胞、溶血素(2单位)、待检血清、小试管、吸管、37℃水浴箱等。

方法

1、标准曲线的制备

(1)2%血红素溶液配制 吸取5m1 2%绵羊红细胞悬液加入离心管中,2000rpm离心5分钟,去除上清,加蒸馏水2.5m1,待羊红细胞溶解后,再加1.7%NaCl溶液2.5m1,混匀,即为2%血红素溶液;

(2)取小试管11支,按表1分别加入各成分;

(3)混匀后2000rpm离心5分钟,取上清用分光光度计(波长540nm)测光密度值;

(4)以光密度值为纵坐标,溶血%为横坐标,绘出标准曲线。

2、待检血清测定

(1) 取病人血清0.1ml,加PBS 3.9ml,使成1:40稀释,混匀后分装4个小试管,每管1ml;

(2) 加2单位溶血素,每管lml;

(3) 加2%绵羊红细胞,每管lml;

(4) 37℃水浴30分钟;

(5) 2000rpm离心5分钟;

(6) 取上清液测光密度值(540nm波长)。

表1 CH50测定的标准曲线制备
试管号1234567891011
2%血红素(ml)——0.10.20.30.40.50.60.70.80.91.0
2%SRBC(ml)1.00.90.80.70.60.50.40.30.20.1——
PBS(ml)2.02.02.02.02.02.02.02.02.02.02.0
溶血%0102030405060708090100

结果

按下法计算每ml待检血清中的补体含量 (计算4管的平均值)。

例: 病人血清稀释度1:40,测得光密度值为0.48 (平均值),自标准曲线查出溶血%为60,则: 40:X = 50:60;X=40×60÷50=48(单位/ml)。

此结果主要反映通过经典途径活化的总补体的活性。

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