血清粘蛋白测定实验

0.6 mol/L 过氯酸测定血清中蛋白质时粘蛋白不被沉淀，而存留于滤液中，再加磷钨酸使粘蛋白沉淀，然后以酚试剂测定其中蛋白质的含量。

一、实验试剂：

1. 154mmol/L氯化钠溶液．

2. 1.8mol/L过氯酸：取含水量为70％－72％过氯酸28ml，加蒸馏水稀释200ml并标定之．

3. 17.74mmol/L磷钨酸溶液，称取磷钨酸5g溶于2mol/L盐酸中并加至100ml。

4. 酚试剂：于1500ml球形烧瓶中加钨酸钠100g，铝酸钠（Na2MoO4·2H20）25g，水700ml，浓磷酸50ml，浓盐酸100ml：缓缓用细流蒸馏10h。取下冷凝管，加硫酸锂75g，蒸馏水50ml，并加溴水2－3滴，再煮沸15min，以除去多余的溴，冷却后稀释至1000ml，制成的酚试剂为鲜明黄色，置棕色瓶保存，用前取出一部分，以等量蒸馏水稀释之。

5. 1.88mol／L碳酸钠溶液。

6. 标准酪氨酸溶液（1ml＝0.05mg）；精确称取酪AA5mg，以0.lmol／L盐酸溶液并稀释至100ml。

二、实验操作：

血清0.5ml，加154mmo/L氯化钠4.5ml，混匀，1.8mol/L，过氯酸溶液2.5ml，静止10min，用定量滤纸过滤或离心．取溶液2.5ml，加17.74mmol／L磷钨酸0.5ml混匀，静止10min，以3000r／min离心10min，倾去上清液沥干，再加磷钨酸溶液2ml，悬浮沉淀物，同法离心后倾去上清液．取沉淀备用。

按下表测定


混匀，放置37℃水浴15min，取出比色，用分光光度计650nm，比色杯光径1.0cm，以空白管调零，读取各管吸光度。

三、计算：

血清粘蛋白（g／L）＝测定管吸光度／标准管吸光度×1.785血清粘蛋白（mg／L）（以酪氨酸计）测定吸光度／标准管吸光度×75

参考值：以蛋白计为0.71－0.87g/L

以酪氨酸计为33.8土27mg/L

1、本法影响因素很多。正常值观察报告不一，故无论用蛋白或酪AA表示结果，均须说明所采用的方法及正常值。

2、操作中血清与154mmol/L氯化钠液稀释液必须准确。

3、滴加过氯酸的速度宜慢。以30－40s时间内加完2.5ml为宜，速度过快易发生混浊，离心后不易得到清晰的上清液。

4、过氯酸沉淀血清蛋白在30℃以下进行较好，否则结果编低。

5、过氯酸为强氧化剂，应按危险品条例保存。