乙醇苏丹黑B脂类染色法
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乙醇苏丹黑
B
脂类染色法 苏丹染色法常用染料有苏丹黑B(Sudanblack-B)、苏丹Ⅲ和苏丹Ⅳ。这类染料均可使 中性脂肪着色。苏丹黑B为重氮染料，能使中性脂肪呈蓝黑色，显示磷脂效果最好；苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ为红色染料，后者比前者显色更强。 当组织切片置于染料时，苏丹黑B离开染液而溶于组织内的脂滴中，使组织内的脂类着色。由于苏丹黑B可与大多数脂类高度结合，故在组织化学上常用此法作为脂类存在的依据。此法常用?0％乙醇配制苏丹黑B的饱和液作为染剂，也可用?0％乙醇与丙酮各半的混合液作为溶剂。 （一）染色程序 1．冰冻切片，厚8～15um； 2．蒸馏水洗后，入70％的乙醇浸洗； 3．置人苏丹黑B染液(70％乙醇配制苏丹黑B的饱和液)中染色10～35分钟； 4．入50％乙醇分色； 5．蒸馏水洗； 6．苏木精复染，1％HCl分色； 7．自来水冲洗； 8．甘油明胶封片。结果：组织细胞中脂类呈蓝黑色，核呈蓝色。 （二）注意事项 当苏丹黑B溶于丙酮、壬烷和癸烷中会发生颜色变化，即由黑色变为紫红色，此现象称异染性，表明脂类染料需选择合适的溶剂。原则是染料在脂肪中的溶解度必须大于它在溶剂中的溶解度。在染色过程中不能使用溶解被检组织脂类的试剂，染料应容易配制，并能长期保存。配制染料的常用溶剂是70％乙醇，有轻微溶解脂类的作用。为避免脂滴被溶解。可将乙醇浓度降低，用低浓度乙醇溶液作长时间染色。用饱和异丙醇或丙二醇配制成不溶解脂类的染料溶液．能保留极小的脂滴，显色效果较好.
