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乙醇苏丹黑B脂类染色法

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乙醇苏丹黑 B 脂类染色法
苏丹染色法常用染料有苏丹黑B(Sudanblack-B)、苏丹Ⅲ和苏丹Ⅳ。这类染料均可使 中性脂肪着色。苏丹黑B为重氮染料,能使中性脂肪呈蓝黑色,显示磷脂效果最好;苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ为红色染料,后者比前者显色更强。
当组织切片置于染料时,苏丹黑B离开染液而溶于组织内的脂滴中,使组织内的脂类着色。由于苏丹黑B可与大多数脂类高度结合,故在组织化学上常用此法作为脂类存在的依据。此法常用?0%乙醇配制苏丹黑B的饱和液作为染剂,也可用?0%乙醇与丙酮各半的混合液作为溶剂。
(一)染色程序

1.冰冻切片,厚8~15um;

2.蒸馏水洗后,入70%的乙醇浸洗;

3.置人苏丹黑B染液(70%乙醇配制苏丹黑B的饱和液)中染色10~35分钟;

4.入50%乙醇分色;

5.蒸馏水洗;

6.苏木精复染,1%HCl分色;

7.自来水冲洗;

8.甘油明胶封片。

结果:组织细胞中脂类呈蓝黑色,核呈蓝色。
(二)注意事项

当苏丹黑B溶于丙酮、壬烷和癸烷中会发生颜色变化,即由黑色变为紫红色,此现象称异染性,表明脂类染料需选择合适的溶剂。原则是染料在脂肪中的溶解度必须大于它在溶剂中的溶解度。在染色过程中不能使用溶解被检组织脂类的试剂,染料应容易配制,并能长期保存。

配制染料的常用溶剂是70%乙醇,有轻微溶解脂类的作用。为避免脂滴被溶解。可将乙醇浓度降低,用低浓度乙醇溶液作长时间染色。用饱和异丙醇或丙二醇配制成不溶解脂类的染料溶液.能保留极小的脂滴,显色效果较好.

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