RNAi动物实验的简单方法——体内转染

摘要：由于RNAi实验技术的推广和应用，人们在体外培养细胞中进行RNAi实验已经比较容易。随着研究的深入，人们需要将研究扩展至更自然的细胞和体内环境。一种像做体外转染一样的简单易用的方法已经出现，这就是动物体内转染试剂。

由于RNAi实验技术的推广和应用，人们对特定基因"敲除"或"沉默"变得越来越简单，研究也越来越多。在体外培养细胞中进行RNAi实验已经比较容易，人们只需要选择合适的培养细胞系，用特定的核酸和转染试剂即可完成相应的转染。

随着研究的深入，人们需要将研究从经过人工改造的细胞和模拟的简单的人工培养环境，转向自然的细胞和体内自然复杂的环境，揭示更符合真实自然的疾病和生命秘密，并向应用更进一步。

但以前动物实验往往让人望而却步，主要的原因是没有简单可靠的方法进行，花费的时间和周期长，达不到预期的效果。以前人们如果想在动物体内进行基因转移实验，主要是通过腺病毒或慢病毒的方法进行。病毒感染的方法主要过程是，构建相应的病毒载体，然后在细胞中进行病毒包装。通常情况下包装一次病毒至少几个月，花费几万到十几万，如果实验重复，这个时间和花费就更大了。病毒感染的方法，由于是病毒主动侵袭，一般认为效率高。

但在实际应用过程中，由于包装过程复杂，任何一个环节出错，都有可能导致包装失败或包装出来的病毒效率低下。此时，由于环节众多，往往不易查找原因。对采用病毒包装进行RNAi实验来说，由于需要选择具有最佳干扰效率的核酸序列，往往需要不断调整，如果每次调整都需要重新包装病毒来说，那么效率就太低下了，同时花费也非常大。而且，病毒还存在对研究者和环境的生物安全的问题。

那么有没有像体外细胞转染一样简单易用的方法呢，只需要花几百元合成小片断RNA，然后用转染试剂就完成转染。很多研究者已经进行过尝试，他们发现，如果简单用体外转染试剂进行转染，会面临几个问题。

首先是体外培养基和动物体内的体液系统是完全不同的，一些适合体外转染的转染试剂，如脂质系统，是很容易被体内的体液系统所破坏和免疫清除的。其次是一些转染试剂在体外进行时，毒性已比较明显，如果进行体内转染，那么动物发生炎症反应的比例也会很高，这样不仅不能产生良好的转染效果，而且干扰了实验效果，甚至导致动物的死亡。所以，一些普通的体外转染试剂是不支持进行体内转染的。

如果需要在动物体内采用转染试剂进行转染，这要求：

1.转染试剂能耐受体内复杂的环境，不会被体内免疫系统识别清除，产生免疫反应。

2.转染试剂效率要高，毒性要低，众所周知，原代细胞比传代细胞要难转染得多，而体内转染又要比体外转染要难。所以转染的效率一定要高，同时，毒性要低，这样才能产生显著的转染效果，以利于实验观察。

英格恩生物近期推出的动物体内专用转染试剂EntransterTM-in vivo，非脂质体，采用纳米技术合成，能耐受体内复杂的环境，不产生免疫反应。而且转染效率高，方法简单。只需要将核酸和转染试剂稀释混合，无需过滤，即可直接注射动物进行实验。EntransterTM-in vivo的价格也非常合适，只相当普通的体外转染试剂的价格。对需要动物实验，经费、时间和实验条件有限的实验室来说，无疑是好消息。

EntransterTM-in vivo动物体外转染试剂虽然推出时间不长，但由于其方法、价格和效果上的突出优点，已被许多实验室采用，并有相当的应用文献发表。