材料与仪器
动物活体成像系统、气体麻醉系统、小鼠等
步骤
一、检查设备
仪器主要包括动物活体成像系统、气体麻醉系统等,检查仪器设备,必须使其处于正常运转状态,以保证实验顺利进行。
二、注射底物
如果进行生物发光成像,需在麻醉前注射荧光素底物。动物腹腔注射荧光素,最佳开始检测的时间是注射后 10min,荧光素的最适用量是 150mg/kg,即体重 20g 的小鼠需要 3mg 的荧光素。
三、动物麻醉
光学成像可选用注射麻醉药剂和气体麻醉,注射可用水合氯醛或戊巴比妥钠等进行腹腔注射。
气体麻醉可釆用异氟烷吸入性麻醉药剂,麻醉诱导和复苏均较快。大小鼠一般使用浓度为 2% 的异氟烷与氧气混合使用。
四、摆放小动物
成像时可将小动物麻醉后直接摆放至设备的动物平台上,,将待检测部位朝向上方[相机镜头的方向],一般采取仰卧位。
五、检査位置
关闭暗箱门,点击软件的预览功能,以确定小动物位置是否在视野中央,可在视野内并排摆放多只小动物。
六、设置拍摄参数
根据实验要求选择相应的滤光片组,生物发光成像只需设置曝光时间和 Binning 值。荧光成像则根据荧光物质种类选择相应激发光和发射光滤光片。
七、图像处理
曝光结束后获得图像,系统会进行明场图和发光图或荧光图融合,调整灰度优化显示效果,并进行 ROIs 定量分析。
来源:丁香实验