在重组蛋白纯化的过程中,研究者常常利用融合表达的各种亲和标签,通过一步法亲和纯化的方法获得自己的目的蛋白。其中,6×His•Tag标签因其氨基酸个数少、对蛋白活性影响较小、亲和纯化方便,成为大家常用的选择。但是,His Tag并非万能标签,依然有不少使用限制因素,如:对重金属离子敏感、不适合金属离子螯和层析方法的蛋白;活性不稳定的蛋白;对蛋白纯度要求更高等。所以,研究人员仍然需要不断寻找更适合自己的亲和标签。
Novagen最新推出的Strep•Tag II 8氨基酸小标签,就是一个新选择。我们早已熟知biotin和streptavidin之间能够高度特异的结合,这种特异性结合早已广泛用于免疫或者非放标记反应中。
Novagen模拟Biotin设计了一个8个氨基酸的小标签Strep•Tag II,正好能特异的结合到streptavidin上,又再改造优化streptavidin与小标签的结合位点,使之与Strep•Tag II融合标签的结合力超出普通streptavidin约100倍,称为Strep•Tactin蛋白。当表达产物经过Strep•Tactin亲和纯化柱时,融合表达Strep•Tag II的融合蛋白高特异地结合在亲和柱上,经过反复洗涤杂蛋白后,可以用一种生物素的类似物――2.5 mM脱硫生物素,在温和的PBS或者其他生理条件缓冲系统就能彻底洗脱目的蛋白,温和条件有助于保持蛋白的活性。
一步法快速亲和纯化,获得高达95%纯度目的蛋白 替代金属离子螯和层析方法,避免重金属离子对蛋白的干扰 洗脱条件温和,保持蛋白活性和空间结构 系列携带Strep•Tag II 融合标签的原核、昆虫、哺乳动物细胞表达质粒,满足各种蛋白表达需要 各种预装柱及配套试剂盒,适合手动及FPLC纯化不同要求 丰富齐全的辅助产品,包括Strep•Tag II融合标签单抗、HRP 耦联单抗、携带 Strep•Tag II 标签的蛋白Marker
| |
各类携带Strep•Tag II融合标签的载体特性 |
| pET-51b(+) | pET-52b(+) | pIEx-8 | pIEx-9 | pIEx-10 | pTriEx-5 | pTriEx-6 | pTriEx-7 | 宿主系统及启动子 | E.coli T7lac启动子 | √ | √ | | | | √ | √ | √ | 昆虫 细胞 e1/hr5 | | | √ | √ | √ | | | | 昆虫细 胞10启动子 | | | | | | √ | √ | √ | 哺乳动物CMV ie启动子/ 增 强子 | | | | | | √ | √ | √ | N端特性 | 信号肽序列 | | | | | √ | | | √ | Strep•Tag II | √ | √ | √ | √ | √ | √ | √ | √ | Ek/LIC 位点 | √ | | √ | | √ | √ | | √ | 3C/LIC 位点 | | √ | | √ | | | √ | | C端特性 | Thrombin 位点 | | √ | | √ | | | √ | | His•Tag | √ | √ | √ | √ | √ | √ | √ | √ | 复制子 | 低拷贝ColE1(pBR) | √ | √ | | | | | | | 高拷贝ColE1(pUC) | | | √ | √ | √ | √ | √ | √ | 抗性 | | √ | √ | √ | √ | √ | √ | √ | √ |
Introductory Strep•Tag® II Kit, pET-51b货号:71615-3
Introductory Strep•Tag® II Kit, pET-52b货号:71616-3 推荐试剂盒: 分别含pET-51b、pET-52b载体;配套纯化预装柱、缓冲液及检测用抗体。
• | 1 | Strep•Tactin Superflow Column 1 ml | • | 120 ml | 1X Strep•Tactin Wash Buffer | • | 25 ml | 1X Strep•Tactin Elution Buffer | • | 120 ml | 1X Strep•Tactin Regeneration Buffer | • | 20 ml | Strep•Tag II Antibody, HRP Conjugate | • | 10 mg | pET-52b(+) DNA | • | 0.2 ml | Induction Control D |
|
<center> </center>