甜甜pepper
最近构建好了质粒,N端是flag,C端是HA。Western blot结果中,HA曝光出来了,但是Flag没有(有阳性对照,不是抗体的因素),质粒测序正确,想问问大家可能是哪里出了问题哇
龙大人驾到
可能有如下几方面的问题蛋白质表达水平过低:如果蛋白质的表达水平很低,那么Flag标签就可能很难被检测到。
1.Flag抗体效仿不足:Flag抗体可能不够敏感,导致Flag标签没有被检测到。
2.Flag标签不稳定:Flag标签在表达和纯化过程中可能不稳定,导致在Western blot实验中没有被检测到。
3.Western blot技术问题:有可能是技术问题,例如抗体稀释比例不合适,板材过于热或者环境条件不稳定等。
毛利小五郎的徒弟
可以增加上样量后再检测,可能是样本量太小。
loveliufudan
有几个因素可能导致Flag标签没有被检测到:
表达量过低:如果构建的质粒表达量很低,那么Flag标签可能难以测到。
蛋白的不完整性:如果Flag标签的表达蛋白不完整,那么它可能难以被检测到。
标签位置不对:如果Flag标签的位置不在蛋白的正确位置,可能难以检测到。
抗体效仿不佳:如果Flag标签抗体的效仿不佳,那么Flag标签可能难以检测到。
组织存在问题:如果蛋白的表达存在组织特异性,那么Flag标签可能在一些组织中难以被检测到。
建议您考虑这些因素,并进一步验证质粒的表达和蛋白的完整性,以确定问题的具体原因。
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