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蛋白标签

相关实验:油脂介孔膜蛋白结晶

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甜甜pepper

最近构建好了质粒,N端是flag,C端是HA。Western blot结果中,HA曝光出来了,但是Flag没有(有阳性对照,不是抗体的因素),质粒测序正确,想问问大家可能是哪里出了问题哇

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3 个回答

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龙大人驾到

有帮助

可能有如下几方面的问题蛋白质表达水平过低:如果蛋白质的表达水平很低,那么Flag标签就可能很难被检测到。

1.Flag抗体效仿不足:Flag抗体可能不够敏感,导致Flag标签没有被检测到。

2.Flag标签不稳定:Flag标签在表达和纯化过程中可能不稳定,导致在Western blot实验中没有被检测到。

3.Western blot技术问题:有可能是技术问题,例如抗体稀释比例不合适,板材过于热或者环境条件不稳定等。

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土井挞克树

有帮助

可以增加上样量后再检测,可能是样本量太小。

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loveliufudan

有帮助

有几个因素可能导致Flag标签没有被检测到:


表达量过低:如果构建的质粒表达量很低,那么Flag标签可能难以测到。

蛋白的不完整性:如果Flag标签的表达蛋白不完整,那么它可能难以被检测到。

标签位置不对:如果Flag标签的位置不在蛋白的正确位置,可能难以检测到。

抗体效仿不佳:如果Flag标签抗体的效仿不佳,那么Flag标签可能难以检测到。

组织存在问题:如果蛋白的表达存在组织特异性,那么Flag标签可能在一些组织中难以被检测到。

建议您考虑这些因素,并进一步验证质粒的表达和蛋白的完整性,以确定问题的具体原因。

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