红细胞比容的测定

[实验目的]

　　学习和掌握测定红细胞比容的方法。

[实验原理]

　　将定量的抗凝血灌注于特制的毛细玻璃管中，定时、定速离心后,有形成分和血浆分离，上层呈淡黄色的液体是血浆，中间很薄一层为灰白色，即白细胞和血小板（或栓细胞），下层为暗红色的红细胞，彼此压紧而不改变细胞的正常形态。根据红细胞柱及全血高度，可计算出红细胞在全血中的容积比值，即为红细胞比容（压积）。

[实验对象]

　　动物种类不限

[实验药品]

　　草酸盐抗凝剂(0.8 g草酸钾·H 2 O + 1.2 g草酸銨·H 2 O + 甲醛1 ml + 蒸馏水至100 ml)或10 g·L-1肝素，橡皮泥或半融化状态石蜡，75%酒精。

[ 仪器与器械]

　　毛细玻璃管（内径1.8 mm，长75 mm）或温氏分血管,酒精灯，水平式高速毛细管 离心机 (或普通 离心机 )，天平，注射器，长针头，干棉球，刻度尺（精确到mm）。

[实验方法与步骤]

　　1. 微量毛细管比容法

　　（1）以抗凝剂湿润毛细管内壁后吹出，让壁内自然风干或于60 ℃～80℃干燥箱内干燥后待用。

　　（2）取血：常规消毒，穿刺指（或尾）尖，让血自动流出，用棉球擦去第一滴血，待第二滴血流出后，将毛细管的一端水平接触血滴，利用虹吸现象使血液进入毛细管的2/3（约50 mm）处。

　　（3）离心：用酒精灯溶封或橡皮泥、石蜡封堵其未吸血端，然后封端向外放入专用的水平式毛细管离心机，以12000 r·min-1的速度离心5 min。届时用刻度尺分别量出红细胞柱和全血柱高度（单位 mm）。计算其比值，即得出红细胞比容。

　　2. 温氏分血管比容法

　　（1）取大 试管 和温氏分血管各一支，用抗凝剂处理后烘干备用。

　　（2） 取血 ：可采取静脉取血或心脏取血，将血液沿大 试管 壁缓慢放入管内，用涂有凡仕林的大拇指堵住 试管 口，缓慢颠倒 试管 2～3次，让血液与抗凝剂充分混匀，并不能使血细胞破碎，制成抗凝血。 用带有长注针头的注射器，取抗凝血2 ml将其插入分血管的底部，缓慢放入，边放边抽出注射针头，使血液精确到10 cm刻度处。

　　（3） 离心 ：将分血管以3000 r·min-1离心30 min，取出分血管，读取红细胞柱的高度，再以同样的转速离心5 min，再读取红细胞柱的高度，如果记录相同，该读数的1/10即为红细胞比容。

[注意事项]

　　1.选择抗凝剂必须考虑到不能使红细胞变形、溶解。草酸钾使红细胞皱缩，而草酸銨使红细胞膨胀，二者配合使用可互相缓解。鱼类多用肝素抗凝。

　　2.血液与抗凝剂混合、注血时应避免动作剧烈引起红细胞破裂。

　　3.用抗凝剂湿润的毛细玻璃管（或温氏分血管）内壁后要充分干燥。血液进入毛细管内的刻度读数要精确，血柱中不得有气泡。

[实验结果]