放射免疫标记技术

一、放射免疫标记技术

放射免疫标记技术是将同位素分析的高灵敏度与抗原抗体反应的特异性相结合，以放射性同位素作为示踪物的标记免疫测定方法，由于此项技术具有灵敏度高 (可检测出毫微克(ng)至微微克(pg)，甚至毫微微克(fg)的超微量物质，特异性强(可分辨结构类似的抗原)、重复性强、样品及试剂用量少、测定方法易规范化和自动化等多个优点。因此、在医学及其他生物学科的研究领域和临床实验诊断中广泛应用于各种微量蛋白质、激素、小分子药物及肿瘤标志物等的分析与定量测定。

二、放射免疫测定(RIA)

放射免疫测定(Radio immunoassay，RIA)是1959年Yalow和Berson首先创建的经典放射免疫分析技术，用于血清中胰岛素含量的测定。30多年来，由于此项技术灵敏、特异、并已制成多种标准试剂盒，使用方便，应用范围十分广泛。目前国外已成功地应用RIA检测的物质多达300余种，国内研究的被测物质也达百余种，试制的RIA试剂盒已有60余种，是测定各种微量物质不可缺少的手段。基本原理：RIA是标记抗原和未标记抗原对有限量抗体的竞争性结合或竞争性抑制反应。在RIA反应系统中，标记抗原(Aundefined)、末标记抗原(Ag)和特异性抗体(Ab)三者同时存在时，由于两种抗原具有相同的决定簇，互相竞争结合抗体的能力相同，结果形成Aundefined-Ab和Ag-Ab复合物。

当Aundefined和Ab的量固定时，二者结合形成免疫复合物就受到Ag含量的制约。如反应系统中Ag含量高时，对Ab的竞争结合能力就强，Ag-Ab复合物的形成量就增加，Aundefined-Ab复合物则相对减少；反之，当Ag含量低时，对Ab的竞争结合能力弱，Aundefined-Ab复合物的形成量即增多。因此，Aundefined-Ab复合物的形成量与Ag含量之间呈一定的负相关函数共系。

三、免疫放射测定(IRMA)

1968年Miles和Hales应用同位素标记的抗胰岛素抗体检测牛血清中胰岛素获得成功，为了区别于经典的放射免疫测定(RIA)，他们将其称为免疫放射测定或免疫放射度量分析(IRMA)。由于在反应系统中使用过量的标记抗体，且无竞争性抑制反应，因此抗体与待测抗原达到结合状态的化学平衡，在 2-3h即可完成，较少受到抗体亲和常数的限制，即使单克隆抗体的亲和力较低，也能满足试验要求。同时一个抗原分子可以结合多个标记抗体分子，使IRMA 的灵敏度明显高于RIA。

基本原理：IRMA是待测抗原与过量标记抗体的非竞争综合反应，然后加入固相的抗原免疫吸附剂以结合游离的标记抗体，离心除去沉淀，测定上清液中放射性强度．从而推算出检品中抗原含量。

四、放射受体分析(RRA)

受体是存在于细胞膜表面、细胞浆或细胞核内的生物活性物质，其功能是和细胞外的信息分子配体特异性结合，然后将信息转变为生物效应。受体现已可从细胞或组织中分离、提取，进行定量和定位分析。放射受体分析或受体的放射配体结合分析，是建立在放射性标记配体与受体之间的结合反应，它是目前对受体分子进行定量和定位分析研究的灵敏、可靠的一项技术。在药物设计、作用机理、生物效应及疾病的病因探讨，诊断和治疗等方面的应用已有较大进展。

基本原理：放射受体分析的原理与免疫放射测定相似。应用放射性同位素标记配体，在-定条件下与相应受体结合成配体-受体复合物。由于二者的结合是表达配体与受体间的生物活性而非免疫活性，因此具有更高的特异性。放射受体分析可用于测定受体的亲和常数、解离常数、受体结合数以及定位分析等。