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树突状细胞及其培养基

丁香园

8685
树突状细胞培养操作步骤

准备补充剂

将补充剂混合物在 15~25℃ 解冻。在无菌条件下用移液枪小心地将补充剂混合物混匀。然后,把补充剂混合物全部加到基础培养基中。盖上瓶子,轻轻混匀直到形成均一的混合物。DC生成培养基所附带的相应的细胞因子组合包含有成分A和B,它们都是以100X 的原液状态运输的。

注意:此时不要将化合物B加入培养基中。

DC基础培养基不带细胞因子,因此使用时必须另外自行添加。

新鲜分离的单核 DC 细胞的传代

对于新鲜分离自外周血单核细胞或者单个核细胞的单核树突状细胞的传代 ,P romoCell 建议使用树突状细胞生成培养基 DXF(C-28052)。详情如下:

1、使细胞附着(第 0 天)

新分离的细胞接种到适量的 PromoCell DC 生成培养基DXF中(不含细胞因子)。单核细胞的接种密度为200-300万/cm2,纯化的单核细胞则为50万/cm2。在37℃和5%的CO2 的培养箱中培养1小时。

2、清洗附着的细胞(第 0 天)

用力晃组织培养皿使未附着的细胞脱落并吸去。用温热的 PromoCell DC 生成培养基 DXF(不含细胞因子)洗三次, 吸走 上清液。

3、开始分化为不成熟的单核 DC 细胞(第 0 天)

加入适量的混有 1x 化合物 A 的 P romoCell DC 生成培养基 DXF,在 37 ℃和 5 %的 CO2 的培养箱中培养3天。

4、更换培养基(第 3 天)

在第3天的时候更换 培养基:从细胞中吸走培养基,收集在一个离心管中。然后立刻吸取新鲜的与1x化合物A混合的DC生成培养基DXF加入到细胞中。在 180g 的离心力条件下离心10分钟。弃去上清液,然后小心地用少量新鲜的培养基重悬细胞。将离心管中的重悬的细胞和组织培养皿 中的新鲜培养基中的细胞混合。将未成熟的单核 DC 细胞在 37℃ 和 5%的 CO2的培养箱中再培养 3 天。

注意:附着的松散附着的和未附着的细胞在这一阶段都能看见。未成熟的细胞,也称为含蓄的细胞,它们的外观看起来是不规侧的树干状的细胞,偶尔有大型的细胞质突起。它们呈现 CD45+/CD83-的表现型,对 CD14 染色显示阴性至弱阳性。

5、完成单核 DC 细胞的成熟过程(第 6 天)

第6天在培养后的培养基中加入适量化合物B原液(混合后化合物B的终浓度为1x)以完成单核DC细胞的成熟过程。不要更换培养基,在37℃和5%的 CO2的培养箱中再培养24-48小时。

6、收获成熟的单核 DC 细胞(第 7/8 天)

反复上下吹洗几次以吹打松散附着的细胞。将含有细胞的培养基转移到 50ml 的离心管中。用180g 的离心条件下将收货的单核 DC 细胞离心10分钟,弃去上清液。

注意:成熟的单核 DC 细胞都是非贴壁细胞,由于他们有多个螺旋状树突,而表现出奇特的形态。

7、进行您的工作

重悬并计算细胞,您现在可以用单核DC细胞进行下一步的工作。另外,可以用流式细胞仪检测 CD14,CD45 和 CD83 来验证树突状细胞的免疫表现型。

注意:使用混合有细胞因子包的 PromoCell 的 DC 生成培养 基DXF传代得到的成熟单核 DC 细胞的表面抗原形态为 CD14-/CD45+/CD83+。









相对应细胞形态一览表



DC的主要特点:
• 不需要磁珠等复杂方式分离提纯血细胞
• 细胞诱导增殖速度快,整个过程仅需7-8天
• 操作过程简单,只要严格操作就能拿到最好的诱导效果
• 既可以培养新鲜分离的单核细胞,也能适用于冻存的单核细胞
• 共有三种方案可以实现单核细胞向树突状细胞的转变
• 无血清,无动物源性,化学成分确定
• 诱导效果确切

DC的优点:
• 使用成本低,操作简单
• 降低污染风险
• 批间差异最小化
• 血清的影响最小化
• 可以轻松地实现在体外从单核细胞得到树突 状细胞
• 诱导效率高
• 细胞诱导效果确切

PromoCell DC DXF 产品和同类产品相比较
PromoCell的DC细胞生成培养基和市面上其他的培养基想比,在 同等培养时间和细胞供体情况下,其培养效率为竞争对手的5倍。
Fig.:Comparison of moDC yield.Freshly isolated peripheral blood monocytes were cultured for 10 days in the respective media. Each of the media was supplemented with the PromoCell cytokine Pack moDC DXF.



使用PromoCell DC生成介质为树突状细胞的生成DXF有什么优势?
DC DXF(C-28052)是一种无血清,化学定义的不含动物来源的诱导培养基。它提供了一个完整的培养系统 (即用型,包括所有细胞因子),在体外即可诱导新鲜分离的外周血单核细胞又可诱导冻存细胞,在DC细胞的诱导上显示了高效性,重复性 好的卓越性能。

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