细胞膜的凋亡检测的原理

在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧，细胞发生凋亡早期，膜磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。

在细胞发生凋亡时，膜磷脂酰丝氨酸外翻的发生早于细胞核的变化，而此阶段Propidium Iodide（PI）不能通过细胞膜。细胞坏死时，虽然也会发生磷脂酰丝氨酸外翻，但此时细胞膜的通透性明显增加，PI等核酸染料进入细胞与细胞核中的核酸结合，发出红色荧光。所以Annexin V-FITC(绿色荧光)常与鉴定细胞死活的核酸染料（如PI）合并使用，来区分凋亡细胞与死亡细胞。 此试剂盒可用于流式细胞仪和组织切片染色。

【关于流式图的说明：横坐标的数值表示荧光强度；纵坐标的数值表示细胞数；10² －10³ 之间高荧光强度的峰为凋亡细胞。】

【双染流式图的说明：图中横坐标不少Annexin V－FITC的荧光强度，纵坐标表示PI的荧光强度，各象限的点表示细胞数。图中：左下象限为正常细胞（Annexin V和PI均低染），右下象限为凋亡细胞（Annexin V高染而PI低染），右上象限为坏死或晚期凋亡细胞（Annexin V和PI均高染）