免疫组化实验DAB显色时间如何把握？

（1）DAB显色时间不是固定的，主要由显微镜下控制显色时间，到出现浅棕色本底时即可冲洗；

（2）DAB显色时间很短（如几秒或几十秒）就出现很深的棕褐色，这很可能说明你的抗体浓度过高或抗体孵育时间过长，需要下调抗体浓度或缩短你的抗 体孵育时间；

（3）此外，若很短时间就出现背景很深，还有可能你前面的封闭非特异性蛋白不全，需要延长封闭时间；

（4）DAB显色时间很长（如超过十几分钟）才出现阳性染色，一方面可能说明你的抗体浓度过低或孵育时间过短（最好一抗4度过夜）；另一方面就是封 闭时间过长。

DAB显色一定不要超过10min，最好控制在5min之内。鉴于你的结果，我建议你考虑以下问题：

1、一抗的有效性。

2、二抗的有效性。

3、DAB是否有效。

以上问题都很好解决，曾经有位战友亦遇此问题，最后弄清楚是二抗失效。
此外，一切都没问题时，DAB显色在30秒之内即出结果，并且一定要在镜下控制，否则，时间过长，非特异性染色会出现，背景加深。