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红细胞裂解液的配制

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21428

红细胞裂解液(Tris-NH4Cl):称取3.735g氯化铵、三羟甲基氨基甲烷(Tris)1.3g加水溶解并稀释至500ml。0.22μm滤膜过滤除菌,4℃保存。细胞悬液加红细胞裂解液后,混匀静止4-5分钟,待红细胞完全破碎,1000r/min离心5分钟,弃上清去除红细胞,得到白细胞沉淀。
结果第一次用的时候,觉得还可以,第二次和第三次用的时候离心后发现有絮状物质,不能很好的沉淀出白细胞。


(一)1 试剂配制  
原液1号:10 g葡萄糖+0.6 g磷酸二氢钾+3.58 g磷酸氢二钠(7H2O)+20 ml 5 g/L酚红溶液,加双蒸水定容至1 000 ml。


原液2号:1.86 g氯化钙(2H2O)+4.0 g氯化钾+80 g氯化钠+1.04 g氯化镁+2.0 g硫酸镁(7H2O),加双蒸水定容至1 000 ml。


应用液有3种,1#:10 ml原液1号+10 ml原液2号,加双蒸水定容至100 ml。


2#:20 ml原液1号+20 ml原液2号,加双蒸水定容至100 ml。
3#:1 ml原液1号+1 ml原液2号,加双蒸水定容至100 ml。


2 红细胞裂解 
取100 μl抗凝全血,加2 ml应用液3#,混匀15~20 s;加2 ml应用液2#,混匀15~20 s;加4 ml应用液1#,混匀15~20 s;300×g离心2 min,弃上清;收集沉淀,加PBS缓冲液,制成白细胞悬液,备用。
(这种红细胞裂解法满足了白细胞流式细胞仪检测分选要求,价格低廉,是一种简便快捷、经济实用的白细胞纯化分选方法。


1 红细胞裂解液(0.01mol/L Tris-HCL pH7.6; 0.01mol/L NaCl; 0.005mol/L MgCl2)


2 红细胞裂解液(139.6 mmol/L NH4Cl, 16.96 mmol/L Tris, 用1 mol/L HCl调 pH至7.2)


3 红细胞裂解液的制备:碳酸氢钾(KHCO3)1.0g;氯化氨(NH4CL)8.3g;EDTA-Na2 0.037g,加双蒸水至1000ml,即工作液。


(该配方出自《实用流式细胞术彩色图谱》)


(责任编辑:大汉昆仑王)

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