快速TA克隆的突破

快速TA克隆的突破

T载体是TA克隆载体的简称，就是利用载体的T末端和PCR产物的A末段连接而将目的基因克隆到载体中的方法。

目前市场上常见的T载体，根据连接方法可以分成两种：

方法1、以T4连接酶进行连接的方法，这种方法的载体有promega、takara；

可以说这两家公司将这两种方法发挥到了很高的水平，转化子比较多，阳性率也不错，唯一的不足就是连接的时间长。因为连接时间越长效率越高，要达到较好的连接效率，一般要过夜连接。国内很多公司模仿这种方法制作T载体，不仅连接时间也很长，而且做不到promega、takara的阳性率和稳定性。

方法2、以拓扑异构酶(TOPO)进行连接的方法，最早采用这种连接方法的是INVITROGEN（英俊公司），并且申请了专利，这种方法的优势是快速连接，在 5-15分钟就可以将目的基因克隆到载体中，阳性率比较高，这种方法国内也有人模仿，照理说，这种载体能迅速的替代promega、takara。

但是为什么promega、takara的载体销售还是主流呢？

那就要说一下拓扑异构酶这种连接方法的缺点：

1、长片段的连接效率很低，大于1.5K的片段用这种方法连接效率很低；

2、转化子少，虽然阳性率高，但是转化子少；

3、稳定性比较差，拓扑异构酶对温度很敏感，运输的温度和连接的温度都会影响，用水浴锅控制连接温度因为温度误差比较大就很难连接，必须用PCR仪；

4、经常会测序无信号，从测序公司的反馈，这种载体经常会导致T7启动子丢失，测序无信号，必须换引物才能测序。

这两种方法各有优缺点，有没有一种T载体能够兼备两种方法的优点，而克服两种方法的缺点呢？

一直致力于生物技术原创技术开发的百泰克公司新近推出的PUM-T载体兼具两种方法的优点，不仅提高了连接效率和阳性率，而且连接时间仅仅需要10-15分钟，即使难以连接的长片段DNA（1.5K以上）的连接效率也远远超过TOPO克隆的方法，极大的方便了生物科研工作者的研究，节约了时间提高了效率！

工欲善其事，必先利其器！磨刀不误砍柴工！我们期待更多的致力于技术原创 的生物公司能够带来更多方便的产品，更多国内的生物技术公司能够逐渐占领生物技术的高地，在给我们带来方便的同时，也降低了整个行业的科研成本，让我们科研工作者有限的资金能发挥更大作用，做更多的研究，为生物技术的发展做出更多的贡献！