用T4连接酶实现10分钟快速TA克隆的新方法
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目前市场上常见的TA克隆试剂盒,根据连接方法可以分成两种:
方法1:
以T4连接酶进行连接的方法,这两种方法转化子比较多,阳性率也不错,唯一的不足就是连接的时间长。因为连接时间越长效率越高,一般快速连接方法需要半个小时到一个小时;达到最佳的效果,要过夜连接。
方法2:
以拓扑异构酶(TOPO)进行连接的方法,这种方法的优势是快速连接,在5-15分钟就可以将目的基因克隆到载体中,阳性率比较高,这种方法国内也有人模仿。这种方法虽然速度快,但是也有一些缺陷,比如长片段连接效率不如T4连接酶,转化子少,TOPO酶对温度很敏感,稳定性较差。
百泰克公司新近又推出了一款用T4连接酶进行10-15分钟快速TA克隆的试剂盒,不仅能够继承T4连接酶连接的优点,而且能够达到10分钟快速克隆的要求,大大的节省了实验的时间,提升了效率。
该试剂盒的连接酶仍然是T4连接酶,但是连接的体系为百泰克自主开发的新技术,能促进片段快速连接,该体系也可以用在其他TA克隆载体的快速连接。