染色体标本制备与观察实验操作规

染色体制片技术显示染色体一般的形态和结构,成功的关键是获得大量染色体缩短适宜的分裂细胞。

1. 压片法

① 取材：在适当的时间选取细胞分裂旺盛的组织。

② 预处理：秋水仙素进行活体或离体处理。

③ 固定：卡诺固定液固定，迅速杀死生活细胞使染色体的组成蛋白变性，保持染色体形态和结构。

④ 解离：1mol/L HCl60℃进行酸解，不同的材料的酸解时间不同。

⑤ 染色：改良石炭酸品红染色。

⑥ 压片染色后盖上盖片，用大拇指按压有材料的部位，粗滤纸吸干多余染液，再用铅笔头轻敲，使重叠细胞分散，得到理想的分裂相。

⑦ 观察：低倍镜找到分散良好的分裂相后换高倍镜或油镜。

⑧ 绘图：会制分散良好的细胞染色体图或拍照进行核型分析。

2. 去壁低渗法

① 前低渗：经预处理的材料转入 0.075mol/L 或蒸馏水中室温下 30min。

② 酶解去壁：纤维素酶和果胶酶混合液处理 2～4h。

③ 后低渗：洗去酶液，蒸馏水处理 10～30min。

④ 固定：制备细胞悬液倒去蒸馏水将材料充分夹碎，加入固定液。

⑤ 制片：用吸管吸取细胞悬液，高度 30～40cm，滴在预冷的载玻片上，在酒精灯火焰上微微加热，室温晾干。

⑥ 染色：10% Giemsa 染液染色。

⑦ 观察：低倍找到分散良好的分裂向后换高倍镜观察。

⑧ 绘制：分散良好的细胞染色体图或拍照进行核型分析。

3. 注意事项

显微镜使用完毕后须对油镜头进行清洁，并将电源关闭，罩上防尘罩。