蛋白质的浓度测定

互联网2013-08-19

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检查试管是否干燥、洁净，若否，则将其洗净并置于干燥箱内120℃烘干。

1.标准曲线的制作

取普通清洁试管7支，标号，1号管为空白，2～7管用微量注射器分别加1.0mg/mL的牛血清白蛋白（即标准蛋白质）溶液10，20，40，60，80，100mL。各管均用0.015mol/L PBS缓冲液补充到100mL（即0.1mL），详见表6-1。混匀待用。

表13-1标准曲线的制作

2.将待测蛋白配成合适浓度

另取3支清洁试管，编号8、9、10，用微量注射器按表6-2操作，将待测蛋白配成系列浓度。

表13-2待测蛋白的稀释

3.加入G250试剂

各试管充分混匀后，用取样器分别加入5.0mL考马斯亮兰G250试剂，每加完一管，立即混合（注意不要太剧烈，以免产生大量气泡而难于消除）。

4.比色

各管室温静置2～5min后，在分光光度计上测定595nm处的光吸收值A 595 ，空白对照为第1号试管，标准和待测蛋白样同时比色。

注意：不可使用石英比色皿（因不易洗去染色），只能使用玻璃比色皿，使用后立即用少量95%的乙醇润洗，洗去颜色。

5.制作标准曲线

以标准蛋白质浓度（mg/mL）为横座标、吸光度值A 595 为纵座标作图，即得到一条标准曲线。

6.根据标准曲线计算待测蛋白浓度

在标准曲线上，根据测出的待测样品的A 595 值，查出试管中蛋白质浓度，再按照计算公式：

待测蛋白质的浓度（mg/mL）＝查出的浓度×稀释倍数

计算出待测蛋白浓度。如样品稀释合理且操作得当，待测蛋白的三个数值应具有同一性，取其平均值作为待测蛋白浓度。如某一光吸收值落在标准曲线线性范围外，舍弃该点。

计算

结果：待测蛋白质的浓度为： mg/mL

(责任编辑：大汉昆仑王)