原理
定量测定赤霉素类物质有许多方法:如大麦糊粉层α-淀粉酶诱导形成法,酸模叶片保绿法,小麦黄化苗第一叶片基部切断伸长法,水稻幼苗第二叶叶鞘伸长的“点滴法”等。其中以水稻幼苗法较好。这一方法利用了赤霉素刺激幼嫩植物节间伸长的重要生理特性。在一定浓度范围(0.1-100pp M )内,叶鞘的伸长与浓度成正比。
材料与仪器
水稻种子
烧杯 高压锅 玻璃箱 玻璃尺
烧杯 高压锅 玻璃箱 玻璃尺
步骤
一、材料与设备
水稻种子
高约6cm 直径约4cm 的玻璃杯或烧杯,高压锅,边长约30cm 高约15cm 的正方形玻璃箱,1 MM 3微量注射器,能分辩1 MM 的玻璃尺。
药品:
100pp M GA3:10毫克GA3溶于100 ml 50%丙酮中。
1%琼脂:将称好的琼脂剪碎,按1:100(W/W)浸入水中,在15磅高压下灭菌20分钟。在琼脂溶胶尚未凝固前倒入玻璃杯中,至溶胶高度达5cm 为止。
饱和漂白粉溶液
二、实验步骤
1.取籽粒饱满的水稻种子,用漂白粉溶液灭菌30分钟,冲洗后再加适量的水,使能盖过种子,在30℃黑暗中发芽2天。
2.种子露白后,选芽长2 M M 的种子,胚芽朝上,排在小杯中的琼脂凝胶上。每杯排放10粒左右种子(见图6)。小杯放进玻璃箱内,盖上盖,放进恒温培养箱中,在30℃,2000-6000勒克斯光照下培养2天。
小杯内的琼脂上在连续光照下培养 滴于胚芽鞘与第一叶之间
3.精选第二叶叶尖刚伸出第一叶,苗高0.9-1cm 的幼苗,将不符合的拔去。
4.用50%的丙酮将100pp M 的GA3稀释成0.1,1.0,10,100pp M 的GA3溶液。
5.从恒温培养箱中取出小烧杯,编号,分别用0.1,1.0,10,100pp M 的GA3处理,对照为50%丙酮溶液。处理方法为:用微量注射器将3 M M 3GA3溶液小心滴于幼苗的胚芽鞘与第一叶叶腋之间(见图7),勿使滑落。如小滴滑落,应立即拔除这一幼苗。每一浓度至少重复三杯。
6.所有点了样的小杯再放入恒温培养箱中培养3天。
7.测定第二叶叶鞘长度(如图8)。
结果
以GA3浓度的对数为横坐标,第二叶叶鞘长度为纵坐标,绘图,此为标准曲线,从中可以查出待测样品中的赤霉素类物质的活性相当于多少浓度GA3的活性。
水稻种子
高约6cm 直径约4cm 的玻璃杯或烧杯,高压锅,边长约30cm 高约15cm 的正方形玻璃箱,1 MM 3微量注射器,能分辩1 MM 的玻璃尺。
药品:
100pp M GA3:10毫克GA3溶于100 ml 50%丙酮中。
1%琼脂:将称好的琼脂剪碎,按1:100(W/W)浸入水中,在15磅高压下灭菌20分钟。在琼脂溶胶尚未凝固前倒入玻璃杯中,至溶胶高度达5cm 为止。
饱和漂白粉溶液
二、实验步骤
1.取籽粒饱满的水稻种子,用漂白粉溶液灭菌30分钟,冲洗后再加适量的水,使能盖过种子,在30℃黑暗中发芽2天。
2.种子露白后,选芽长2 M M 的种子,胚芽朝上,排在小杯中的琼脂凝胶上。每杯排放10粒左右种子(见图6)。小杯放进玻璃箱内,盖上盖,放进恒温培养箱中,在30℃,2000-6000勒克斯光照下培养2天。
图1 选取芽鞘长达2毫米的种子放置 图2 小心将1微升GA3的丙酮溶液
小杯内的琼脂上在连续光照下培养 滴于胚芽鞘与第一叶之间
3.精选第二叶叶尖刚伸出第一叶,苗高0.9-1cm 的幼苗,将不符合的拔去。
4.用50%的丙酮将100pp M 的GA3稀释成0.1,1.0,10,100pp M 的GA3溶液。
5.从恒温培养箱中取出小烧杯,编号,分别用0.1,1.0,10,100pp M 的GA3处理,对照为50%丙酮溶液。处理方法为:用微量注射器将3 M M 3GA3溶液小心滴于幼苗的胚芽鞘与第一叶叶腋之间(见图7),勿使滑落。如小滴滑落,应立即拔除这一幼苗。每一浓度至少重复三杯。
6.所有点了样的小杯再放入恒温培养箱中培养3天。
7.测定第二叶叶鞘长度(如图8)。
结果
以GA3浓度的对数为横坐标,第二叶叶鞘长度为纵坐标,绘图,此为标准曲线,从中可以查出待测样品中的赤霉素类物质的活性相当于多少浓度GA3的活性。
图3 实验终了时测第二叶叶鞘的长度
来源:丁香实验