紫外分光光度法（蛋白质浓度测定）

【器材】 (一)UV-9200紫外分光光度计 (二)50ml容量瓶 【试剂】 (一)生理盐水 (二)清蛋白(人或牛)纯晶 (三)待测样本蛋白质：用双缩脲法测定蛋白质的样品用生理盐水稀释而成。

取试管7支,各管混匀，盛于石英杯中，用紫外分光光度计，以空白管调节零点，分别于280nm、260nm波长下测定各管光密度。 (一)直接根据标准液与待测液的光密度值(OD280nm)，或从标准曲线，求得样本蛋白质含量。 以标准管各管光密度值为纵坐标，以蛋白质浓度为横坐标绘制标准曲线，然后根据测定管光密度值，直接查标准曲线求得样本中蛋白质的含量。 1． 选一种与待测样本蛋白质氨基酸组成相近似的蛋白质纯品，用生理盐水稀释至浓度为lmg/m1，作为稀释标准蛋白质溶液。 2．用生理盐水稀释待测样本蛋白质至浓度约为lmg/m1，即为稀释样本蛋白质溶液。 (二)利用经验公式直接计算样本蛋白质含量， 准确吸取血清样本0.1ml，置于50ml容量瓶中，用生理盐水稀释至刻度，即500倍稀释，在280nm和260nm两处波长分别测得光密度值、再按下列公式计算。 1、OD280/OD260＜1.5时，用Lowry-Kalokar公式：样本蛋白质含量(mg/m1)＝1.45OD280一0.74OD260 2、OD280/OD260﹥1.5时，用Lamber-Beer定律计算：样本蛋白质含量(mg/m1)= OD280/K×L＝（OD280/6.3×1）×10g/L 本实验样品：牛血清白蛋白E1%cm＝6.3（100ml/cm.g） K：克分子消光系数；E1%cm：百分比吸光度的吸光系数；

不同蛋白质中的酪氨酸和色氨酸含量有差异，故标准管与测定管的蛋白质氨基酸组成应相似，以减小误差。