闲人半生
加了蛋白酶抑制剂+磷酸酶抑制剂,裂解。
1. 测浓度并调平每组样本浓度后,分装10-20ul一管,放-20℃还是-80℃?每次取用一管,再加入SDS,煮沸后直接上样。
2. 裂解后直接分装10-20ul一管,放-80℃,每次取一管,测浓度后取出所需用量后其余放回-80℃,加入SDS和裂解液,煮沸后直接上样。
3. 测浓度,加入SDS和裂解液以调平每组样本浓度后,煮沸,分装或不分装?放入-20℃,每次取出,再次煮沸?取适量上样。
哪种方法比较好?或有更好的方法?谢谢。
dxy_gwrp7ndq
纯化后的蛋白测浓度后,加入50%甘油,确认混匀后分装,液氮速冻,放入-20度或-80度保存,尤其适用于酶类。
如即提即用的话,可将浓缩蛋白质储存在单一溶液(如PBS),置于聚丙烯管或干净的玻璃容器中,放在4°C冰箱保存。
bamboopiggy
我建议你选3,将所有样品处理好,测浓度,煮沸变性后分装。长时间保存-80,短时间-20。每次取出,直接化了样品上样。这样对蛋白影响最小。
天一湖医者
1
蛋白提取前加入蛋白酶抑制剂
1.如果蛋白样品需要长期保存,在提取蛋白前,最好将蛋白酶抑制剂加入裂解液中,尽量避免蛋白降解。
2
分装成小管,避免反复冻融
蛋白样品放到-80℃也并不完全保险,虽然能存放久一些,但是最好不要冻融超过两次。建议大家把蛋白分装到小管中,一次只取一个用,这样可以把蛋白样本保存得更久些
3
如果下游实验仅做WB实验
蛋白浓度测定后,可以加入loading buffer 煮样,煮后可根据实验需要分装成小管,下次实验前拿出小管再次煮样即可。
4
加入保护剂
提取蛋白后,可加入10%~50%的甘油作为保护剂,防止被冰晶损伤。
whilt-shirt
样本保存-80,不要一次性提完蛋白,提过的蛋白分成几份放-80,取一份定蛋白,变性后煮沸放-20
未来9
样品建议分装成合适的量(比如分装出 20 ul 检测蛋白质定量用),然后于 -20℃ 或 -80℃ 中长期保存,但要注意不要反复冻融,因为会使蛋白的抗原特性发生改变。