蛋白质浓度测定

蛋白质实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

根据蛋白质特性对蛋白质的浓度进行测定

原理

将尿素加热，两分子尿素放出一分子氨而形成双缩脲（NH2-CO-NH-CO-NH2）。双缩脲在碱性溶液中与Cu2+结合生成紫色络合物，这一呈色反应称为双缩脲反应。蛋白质分子中的肽键类似双缩脲结构，故亦能呈双缩脲反应。在一定的浓度范围内，颜色深浅与蛋白质含量呈线性关系。蛋白质浓度越高，体系的颜色越深。反应产物在540nm处有最大光吸收。将未知浓度的样品溶液与一系列已知浓度的标准蛋白质溶液同时与双缩脲试剂反应，并于540nm比色，可通过标准浓度蛋白质绘制的标准曲线，求得未知样品蛋白质的浓度。

应用

蛋白质浓度测定

来源：丁香实验

操作方法

双缩脲法

1.标准曲线的绘制取6支试管从0～5编号，按下表分别加入各试剂，每加一种试液均须混匀，加毕后于室温放置30分钟，然后以0号管作为空白对照管，540nm处测定各管A值。以标准酪蛋白（mg）为横坐标，A 540值为纵坐标，绘制标准曲线。2.未知浓度的样液测定可用牛奶中提取的酪蛋白配制溶液。未知酪蛋白浓度的样品测定3管。方法步骤与上述标准曲线制作过程的5号管相同，仅用未知浓度酪蛋白溶液1.0mL代替

紫外分光光度法（蛋白质浓度测定）

取试管7支,各管混匀，盛于石英杯中，用紫外分光光度计，以空白管调节零点，分别于280nm、260nm波长下测定各管光密度。 (一)直接根据标准液与待测液的光密度值(OD280nm)，或从标准曲线，求得样本蛋白质含量。以标准管各管光密度值为纵坐标，以蛋白质浓度为横坐标绘制标准曲线，然后根据测定管光密度值，直接查标准曲线求得样本中蛋白质的含量。 1．选一种与待测样本蛋白质氨基酸组成相近似的蛋白质纯